Práctica pruebas bioquimicas

Escuela de Biología

Materia:
Microbiología

Reporte de Práctica:
Pruebas bioquímicas



Objetivo:
-Conocer las características y fundamentos de los medios de cultivo para las pruebas bioquímicas.
-Realizar una identificación lo más cercana posible de la especie microbiana que cada uno de los compañeros aisló, mediante el reconocimiento de su metabolismo.
-Reconocer el metabolismofundamental de las bacterias de acuerdo a la fuente de sustento nutricional.
Introducción:
Las bacterias muestran una variedad sorprendente en cuanto a metabolismo se refiere y durante este proceso, en el laboratorio se pueden usar diversos sustratos que sirven para hacer posible el crecimiento e identificación de estos microorganismos, gracias a las características de los productos finalesde su metabolismo.
Existe un conjunto de medios de cultivo que son muy usados para la identificación bacteriana para realizar las llamadas pruebas bioquímicas. La siembra de esta batería de pruebas bioquímicas debe realizarse a partir de colonias aisladas.
Algunas de estas pruebas son técnicas rápidas, ya que evalúan la presencia de una enzima preformada y su lectura varía entre unos segundoshasta unas pocas horas. Otras pruebas requieren para su lectura el crecimiento del microorganismo con una incubación previa de 18 a 48h; a este grupo pertenecen la mayoría de las pruebas que detectan componentes metabólicos o aquellas que determinan la sensibilidad de un microorganismo a una sustancia dada tras cultivo en medios de identificación que contienen el sustrato a metabolizar. Algunas delas pruebas son las siguientes:
TSI: es un medio nutriente y diferencial que permite estudiar la capacidad de producción de ácido y gas a partir de glucosa, sacarosa y lactosa en un único medio. También permite la identificación de la producción de SH2. Esta es una prueba específica para la identificación a nivel de género en la familia Enterobacteriaceae, con objetivo de diferenciar entre: ·bacterias fermentadoras de la glucosa · bacterias fermentadoras de la lactosa · bacterias fermentadoras de sacarosa · bacterias aerogénicas · bacterias productoras de SH2 a partir de sustancias orgánicas que contengan azufre.
LIA: En este medio se permite evidenciar la descarboxilación del aminoácido lisina en la diamina cadaverina, como también la desaminación de la lisina en un alfa cetoácido. Estasdos reacciones se ponen de manifiesto por el viraje del indicador púrpura de bromocresol. La formación de H2S se pone de manifiesto por la presencia del tiosulfato sódico, que dará formación al sulfato férrico. Además puede verificarse la formación de gas a partir de la degradación de la glucosa.
Citrato de Simmons: Sirve para determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato como únicafuente de carbono y compuestos amoniacales como única fuente de nitrógeno en su metabolismo, provocando una alcalinización del medio. Entre las enterobacterias estas características se dan en los siguientes géneros: Enterobacter, Klebsiella, Serratia, Citrobacter y algunas especies de Salmon|ella. Sin embargo, Escherichia, Shigella, Salmonella typhi y Salmonella paratyphi son incapaces de crecer conesos nutrientes.
Ureasa: Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la urea formando dos moléculas de amoniaco por acción del enzima ureasa. Esta actividad enzimática es característica de todas las especies de Proteus y se usa sobre todo para diferenciar este género de otras enterobacterias que dan negativo o positivo retardado. La prueba también se utiliza para diferenciar Physobacterphenylpyruvicus de Moraxella spp. Helicobacter pylori y Brucella spp. Se observa la capacidad de la bacteria de degradar la urea por medio de la enzima ureasa formando amoniaco y carbonato de aminio, que alcaliniza el medio por lo cual el rojo de fenol vira a un rojo cereza.
MR-VP: se utiliza para el ensayo de Rojo de Metilo y Voges Proskauer. Es particularmente útil para la clasificación de...