Practica 2

ISIS DEL ALMIDÓN POR AMILASA VEGETAL
OBJETIVO: Determinar la presencia de enzimas hidrolíticas durante la germinación por el método colorimétrico tomado como factor el tiempo de actividadenzimática.
GENERALIDADES: Investigación bibliográfica por parte de los estudiantes sobre cinética enzimática de amilasa y factores que afectan la germinación.
MATERIAL POR EQUIPO:
11 Tubos de ensaye (16 x150)
1 Gradilla
4 Pipetas graduadas de 1 ml (plástico)
1 Pipeta de 5 o 10 ml
1 Vaso de Precipitado de 250 ml
1 Mechero
1 Soporte Universal con anillo
1 Embudo de plástico
1 Mortero de porcelanacon pistilo 1 Vaso de precipitado1 Pipeta de 1 ml.
R
EACTIVOS:
Solución de glucosa al 1% Agua destilada
Acido 3,5-Dinitros
1
Solución de Yodo (I2Kl en una solución de HCl 0.05
Solución de CaCl220 mM-NaCl 200 Mm
Solución de Almidón al 0.2
Solución Buffer pH 5
A 1 Balanza Granataria
2 Espectrofotómetros
8 Celdas
L
0-12 Semillas de maíz (Zea mays) ó Frijol (Pha
1
germinación. 1plumón indeleble.
Jabón y franela para
Hielo res de gasa
3 Sob
Masking tape
Ligas.
M
1. Pesa
germinación para la obtención de la amilasa. 2. Moler las semillas en un mortero usando 3 ml de aguadestilada por cada
gramo de tejido. 3. Filtrar la molienda con ayuda del embudo y de dos capas de gasa.
4. Mantener el filtrado en un tubo de ensaye. Permitir que se sedi
mantenerlo en un baño dehielo. 5. Diluya el filtrado 1:10 con solución amortiguadora de acetato pH 5.0, seguir
manteniendo en frio. 6. Prepare la mezcla de reacción en dos tubos de ensaye (13 x 150 mm) de la
siguiente manera:A Y B
4 ml
4 ml
2
L
ensayo A y otro equipo trabajará el ensayo B.
E
solución de yodo. A un tubo agrega
espectrofotómetro al 100% de transmitancia o cero de absorbancia (densidad óptica). Elprimer tubo (tiem
tome 1 ml del tubo de reacción que contiene la enzima diluida, a cada uno de los tubos de la serie que contiene solución de yodo. Agitar
5. Agregar
6. Colocar en una celda y...