Practica 3

PRÁCTICA 3
ELECTROFORESIS: SEPARACIÓN DE PROTEÍNAS EN GELES DE POLIACRILAMIDA
OBJETIVO: utilizar la técnica de la electroforesis en gel para analizar la purificación de la
enzima lisozima. Seanalizará la composición proteica de las distintas fracciones y se constatará el
grado de pureza de la lisozima.
FUNDAMENTO
La electroforesis es la migración de iones en un campo eléctrico. Es una de lastécnicas
analíticas más importantes dentro de la Bioquímica. Las moléculas biológicas (ADN, proteínas,
vitaminas, etc.) poseen cargas eléctricas, y por tanto poseen esta propiedad de movilidad en uncampo eléctrico. La movilidad dependerá de la carga que presentan al pH que trabajemos. La
electroforesis en gel es el método más conveniente para realizar separaciones de
macromoléculas (ADN yProteínas). El soporte de la electroforesis (el gel) es un entramado
tridimensional que impide o reduce la difusión. Este gel ha de ser compatible con los tampones
usados y debe permitir la entrada dellíquido en los poros (reticulados hidratables).
Los soportes pueden ser más o menos restrictivos según que el tamaño de poros limite o
impida el paso de las moléculas. Los más restrictivos, como los gelesde acrilamidabisacrilamida, oponen impedimento al paso de las moléculas, participando así en el proceso de
separación. Entre los menos restrictivos está la agarosa. El tamaño de poro que da unasdimensiones moleculares de criba de los geles puede ser establecido previamente. El gel en la
electroforesis retarda, en mayor o menor medida, a las moléculas mayores respecto a las de menor
tamaño. Lasseparaciones moleculares están pues basadas en el tamizado molecular junto a la
movilidad electroforética de las moléculas que van a ser separadas.
Para llevar a cabo la electroforesis se necesita:A) una fuente de Tensión que proporciona
el campo eléctrico, mediante dos electrodos, positivo (ánodo) y negativo (cátodo), entre los que se
establece la diferencia de potencial. B) una cubeta o...