practica aislamiento de hongos mediante el método de extensión de placa

Universidad del Valle de México

Práctica no. 9 “Aislamiento de hongos mediante el método extensión en placa”

Laboratorio de Microbiología II. Licenciatura QFBT Grupo:. Periodo: 2014-II

Objetivos
El alumno aislará actinomiceto del suelo mediante el método extensión en placa utilizando una varilla angular de vidrio.Fundamento Teórico.
Uno de los problemas más frecuentes en Microbiología es el aislamiento de un cultivo puro de una especie bacteriana dada. A pesar de que es muy difícil aislar una sola célula, existen técnicas capaces de aproximar este ideal.
En Microbiología, todas las manipulaciones deben ser llevadas a cabo de modo que se impida cualquier tipo de contaminación en el área de trabajo. Losprocedimientos utilizados para conseguirlo se conocen con el nombre de técnica aséptica y se citan a continuación:
o Las asas deben esterilizarse antes de utilizarlas y enfriarse sobre el agar o el material de vidrio (en zonas estériles) antes de tomar la muestra de microorganismos, con objeto de no destruirlos por calor, después de utilizarlas, las asas se vuelven a esterilizar.
Las bocas de lostubos y matraces de vidrio se flamean ligeramente una vez destapadas, y después de la inoculación.
Durante la inoculación, los tapones se mantienen en la mano sujetándolos por la parte que no entra en contacto con tubos y matraces.
Los tubos abiertos deben mantenerse en posición inclinada para que el riesgo de contaminación sea mínimo.
Las tapas de las placas Petri no deben colocarse nuncasobre la mesa de trabajo.
Técnicas de siembra:
La siembra de microorganismos puede realizarse en medios líquidos o en medios sólidos.
En el primer caso, para la inoculación se utilizará asa estéril si el medio de partida es sólido, o pipeta estéril (Pasteur o graduada) si es líquido.
En el segundo caso, cuando se parte de otro medio sólido, se utiliza el asa de platino normal para siembra en placao tubo inclinado y el

asa recta para siembra en picadura en tubos rectos o en general, cuando se quiere introducir el microorganismo en el seno del medio

de cultivo sólido; cuando el medio de partida es líquido, se puede pasar al medio sólido con un asa de platino calibrada, con la que se extiende la muestra directamente, o con pipeta (Pasteur o graduada), depositando la muestra que luegose extenderá sobre la placa con un asa de Digralsky. O con una varilla doblada.
En general, en Microbiología se trabaja con cultivos puros de microorganismos. Un cultivo puro es aquél en que todas las células provienen de una sola célula inicial. Una colonia de cualquier microorganismo es un cultivo puro, ya que todas sus células proceden de una inicial; por lo tanto, cuando se desea aislar unmicroorganismo de una muestra cualquiera, es preciso ver colonias del mismo, lo que implica que el aislamiento ha de realizarse en medio sólido en placa.
Los pasos de un proceso de aislamiento de una especie microbiana se pueden resumir en los siguientes pasos:
-Siembra en placa de la muestra de partida.
-Tomar una colonia de la placa una vez incubada, re suspenderla en agua estéril y sembraruna segunda placa, en la que todas las colonias que crezcan deben ser idénticas.
-A partir de la segunda placa se puede re suspender una de las colonias en medio líquido, consiguiéndose ya un cultivo puro.
-Para la conservación de los cultivos puros de un microorganismo existen diversos métodos, el más simple es la resiembra en tubos inclinados que se mantienen, normalmente refrigerados, durante3-6 meses.
Material y Método
Material:
2 pipetas de 1mL
Asa bacteriológica
1 varilla de vidrio doblada
5 tubos de ensayo
Alcohol al 70%
2 cajas con medio de cultivo estéril Czapeck
2 cajas con medio estéril gelosa peptona dextrosa extracto de levadura (GPDL)
2 cajas con medio estéril de gelosa glicerol extracto de levadura (GGL)
Muestra de suelo.
Método:
1. Hacer diluciones decimales...