Practica De Metabolismo

Practica No.6 colesterol

FUNDAMENTO:
La determinación de los niveles de triglicéridos, cuando se lleva a cabo en conjunto con otros ensayos de lípidos, proporciona una ayuda en el diagnóstico de hiperlipoproteinemia primaria y secundaria. También es útil para dar seguimiento a la diabetes mellitus, nefrosis, obstrucción biliar y varias anormalidades metabólicas queresultan de disturbios endócrinos.1,2, 3
1. El glicerol y los ácidos grasos se forman en una primera etapa por la acción de la lipasa sobre los triglicéridos.
2. El glicerol se fosforila por el adenosin-5'-trifosfato (ATP) para producir glicerol-3 fosfato (G-3-P) y adenosin-5'-difosfato (ADP) en una reacción catalizada por la glicerol-cinasa (GK).
GK

Glicerol + ATP G-3-P + ADP

3. LaG-3-P es oxidada por la glicerolfosfato oxidasa (GPO) produciendo dihidroxiacetona fosfato (DAP) y peróxido de hidrógeno.
GPO

G-3-P + O2 DAP + H2O2

4. Los peróxidos reaccionan con 4-aminoantipirina y 4-clorofenol bajo la influencia catalítica de la peroxidasa (POD) para formar una quinoneimina de color rojo.

2H2O2 + 4-aminoantipirina + quinoneimina + hcl +4H2O 4-clorofenol
Material y reactivos:
Reactivo de Triglicéridos enzimático Líquido, Cat. No. 2101
* ATP ………………………………….………………...…………….…2.0 mm
* Sal de magnesio……………………………….………...……………5.0 mm
* 4-aminoantipirina…………………………....………………………...0.7 mm
* Acido m-hidroxibenzoico……………………………………..……….5.0 mm
* Glicerolfosfato oxidasa …………………………………………....> 7000 U/L
* Azida deSodio………………………….……………….……………….0.1 %
* Lipasa……...………………………………………..…..……… > 200,000 U/L
* Glicerol-Cinasa ………………………………………...……………>1000 U/L
* Peroxidasa…………………………………………………………. > 2000 U/L
* Buffer………………………………………………………………….. 50 mm
* Ph ………………………………………………………………………7.3 ± 0.1

Reactivo Triglicéridos activador, cat. No. 2102
Concentrado enzimático, activadores y estabilizadores.
EstándarTriglicéridos 200 mg/dl, Cat. No. 2103
Contiene Glicerol con surfactante equivalente a 200 mg/dl de triglicéridos con trioleina. Azida de sodio 0.1 % como preservativos.
•Espectrofotómetro para leer absorbancias a 500 nm, bloque de calor o baño de
Agua a 310 K (37 ° C), cuvetas, pipetas automáticas y cronómetro.
Tecnica:
Recolección y preparación de la muestra.
Estabilidad de la muestra: Se hareportado estable los trigliceridos hasta
10 días a 275-281 K (2 a 8 ° C). No conserve la muestra a 288-298 K (15-25
° C) ya que los fosfolípidos pueden hidrolizarse y formar glicerol libre que
Puede ocasionar elevaciones falsas de los resultados de triglicéridos.
Substancias Interferentes.
Para la recolección de sangre no debe usarse material que contenga
Glicerol (glicerina), como los quellevan un tapón lubricado. Valores altos de bilirrubina o muestras muy hemolizadas, darán valores altos falsos. Varias
Drogas y otras substancias afectan la determinación de los triglicéridos.
La interferencia de muestras ictéricas y muy hemolizadas puede ser
Corregida usando un blanco de suero o plasma (consulte la sección de
Resultados).
Analizador Automatizado
Parámetros :
* Longitudde onda …………………..……………….. 500 nm
* Tipo de reacción ………………………..…………… Punto final
* Dirección de reacción …..………………….……….. Incremento
* Temperatura de reacción …………….………..…... 310 K (37ºc)
* Relación muestra / reactivo …………………..….… 1 : 100
* Tiempo de equilibrio ……..…………………..…...… 3 segundos
* Tiempo de lectura ………………………………....... 4 segundos
* Tiempo lag……………………………..……….…… 300 segundos
* Absorbancia límite del blanco …………..…….…… 0.500
* Máxima absorbancia ………………….……..…...… 2.000 A
* Estándar …………………….……..……..……..…… 200 mg/dl
* Valor normal bajo ……………………………..…..… 30 mg/dl
* Valor normal alto …..…………………………..….… 150 mg/dl
* Linearidad ……………………………………………. 1000 mg/dl

Absorbancia inicial ……………………….....………. < 0.300
Ph...