Practica No 1

PRÁCTICA No. 3

“TÉCNICAS MICROSCOPICAS”

INTEGRANTES.
GLORIA ELENA GUTIERREZ OROZCO
GLORIA ANDREA CERVANTES CONTRERAS
JANET MEDINA BAUTISTA
LEONOR GRISELDA LINARES BENITES
OMAR ELIGIO MELGOZA SEVILLA

PROFESORA: QFB. ANA MARIA ALVARADO

1º SEMESTRE

ZAMORA MICH. 10 OCTUBRE/2012
OBJETIVO:
El alumno conocerá algunas de las técnicas microscópicas, mediante la tinción de Gram deun frotis bacteriano.
FUNDAMENTO:
El examen microscópico es el primer paso para el estudio de las muestras microbiológicas. Es un examen orientativo que nos proporciona datos como la presencia de bacterias, su morfología, movilidad y características tintoriales y estructurales.
Los microorganismos obtenidos a partir de una muestra clínica pueden verse vivos o muertos, aunque para lainvestigación de algunas características biológicas como la movilidad, es necesario observarlos vivos. Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo mas posible los microorganismo, ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio delportaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la observación al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. La fijación de una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfología.
La tinción de Gram es la coloración diferencial más utilizada enbiología, ya que diferencia a las bacterias en dos grandes grupos: Gram positivas y Gram negativas, según retengan o no el cristal violeta utilizado en la tinción. Prácticamente todos los autores están de acuerdo en utilizar esta tinción como primer paso en la identificación bacteriana. Su importancia reside en que una incorrecta interpretación puede hacer variar el número de pruebas subsiguientesdestinadas a efectuar la identificación, alejándonos considerablemente del género y especie verdaderos.
El fundamento de esta tinción se basa en la incapacidad de las bacterias Gram negativas para retener el cristal violeta cuando son decoloradas por una mezcla de alcohol y acetona. Las bacterias Gram positivas sí retienen el colorante inicial y mostrarán esa coloración al finalde la técnica. Las bacterias Gram negativas cogerán el segundo colorante (safranina) y se mostrarán como bacterias de color rojo.
Bacterias Gram positivas: Se verán de color violeta o azul intenso.
Bacterias Gram negativas: Se observarán de color rojo.

MATERIALES:
 Microscopio
 Portaobjetos
 Cubreobjetos
 Asa bacteriológica
 Mechero de Bunsen
 Cultivo bacteriano
 Soporte paraTinciones
 Equipo de tinción de Gram
Reactivos
- Cristal violeta
- Lugol
- Alcohol cetona
- Safranina
- Agua

PROCEDIMIENTO:
1.- Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una mínima gota de agua, que resultasuficiente.
2.- Flamear el asa de siembra y tomar en condiciones asépticas una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en medio sólido y transferirlo a la gota de agua. Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensión homogénea que quede bastante extendida para facilitar su secado. Si la muestra se toma de un cultivo en medio líquido, no es necesario realizar los dos primeros pasos yaque basta con colocar y extender una gota de la suspensión bacteriana, que se toma con el asa bacteriológica, directamente sobre el portaobjetos.
3.- Esperar hasta que el líquido se evapore a acelerar su evaporación acercando el portaobjetos a la llama del mechero. En este caso hay que tener mucha precaución de no calentar demasiado el portaobjetos pues las células pueden deformarse o romperse....