Precipitacion


LABORATORIO N° 03.
DETERMINACIÓN DE BIOMASA
“PESO HÚMEDO, PESO SECO, TURBIDIMETRÍA”

I. OBJETIVOS

Determinar la concentración en Peso húmedo (g mH/mL) y Peso Seco (g mS/mL) de una solución celular y ver que método es más efectivo.
Calcular el coeficiente de variabilidad de las tres repeticiones en Peso Húmedo y Peso Seco de la levadura de pan.
Determinar la biomasa de una solucióncelular desconocida mediante el método de turbidimetría
Determinar la cantidad de microorganismos en una muestra mediante la aplicación de diferentes métodos.
Hallar el factor de conversión para cada caso, mediante la Curva de Calibración.
Determinar el Porcentaje de Error de los factores de Conversión, relacionando los datos.

II. FUNDAMENTO TEÓRICO
Biomasa es un término general que serefiere a los microorganismos presentes en un sistema. A la vez también se puede referir como la cantidad de células, de personas o masa de seres vivos. El objetivo de la biomasa es la reproducción de células.
La determinación de la biomasa es una de las variables más importantes de un bioproceso ya que su determinación nos lleva a la comprensión de la eficiencia del mismo. Se trata de una variableclave para establecer las tasas de producción, de consumo de nutrientes y el cálculo de los balances de masa de cualquier proceso biológico. Los métodos clásicos de determinación de biomasa son métodos directos que se basan en el número de células o en el peso celular. Para determinar la biomasa es necesario calcular el número de células en una determinada muestra. Esto es importante en ciertascircunstancias; por ejemplo, para determinar la inocuidad de muchos alimentos o drogas se requiere cuantificar los microorganismos en esos productos. Los métodos para estimar el número de microorganismos pueden medir la cantidad de células, la masa celular o la actividad celular. Los métodos que cuantifican la cantidad de células son útiles principalmente para enumerar organismos como bacterias olevaduras, mientras los que miden la masa o actividad celular pueden utilizarse para todos los microorganismos, incluidos los hongos filamentosos, en los que es difícil cuantificar las células individuales.
A. Medida de biomasa
La medida de la masa de los constituyentes de la célula bacteriana es utilizada frecuentemente como base para la medida de una actividad metabólica, o de un constituyentemetabólico o químico. Algunos de los métodos para cuantificar la biomas son obvios y confiables, pero pueden volverse complicados si se busca exactitud.
1. Peso húmedo
Se obtiene a partir de una muestra en suspensión que es pesada luego de la separación de las células por filtración o centrifugación. Es una técnica útil para grandes volúmenes de muestra. La principal desventaja es que eldiluyente queda atrapado en el espacio intercelular y contribuye al peso total de la masa. La cantidad de líquido retenida puede ser importante, por ejemplo, un pellet de células bacterianas muy empaquetadas puede contener un espacio intercelular que aporta entre el 5-30% del peso, de acuerdo a la forma y deformación celular.
Para corregir el peso húmedo se determina la cantidad de líquido que quedaretenida en el espacio intercelular luego de una centrifugación, para ello se utilizan soluciones de polímeros no iónicos (como el Dextran) que pueden ingresar en el espacio intercelular pero no pueden atravesar las paredes bacterianas.
2. Peso seco
La cantidad total de biomasa presente en una muestra puede medirse en términos de peso seco por unidad de volumen, ya sea como sólidos en suspensióntotales (SST) o sólidos en suspensión volátiles (SSV). Las células se separan del líquido bien por centrifugación bien por filtración. Se expresan en g.m.s/mL.
La principal desventaja de estas técnicas es que su determinación incluye no sólo microorganismos activos sino microorganismos muertos, material inerte, polímeros extracelulares y materia orgánica adsorbida. Además, no puede aplicarse...