preparación de muestras

Preparación de muestras para microscopia óptica

Es permitir que las estructuras de los materiales se revelen con suficiente contraste de modo que las características de interés sean descritas, grabadas y caracterizadas en detalles visibles a una escala menor que la agudeza visual del ojo humano.
Criterios en las técnicas de preparación
Asegurar que la muestra a observar es representativadel material, objeto u organismo de procedencia que se desea estudiar.
Hacer que las características de interés sean accesibles al sistema de imagen del microscopio.
Cuando sea necesario, aumentar el contraste entre los elementos estructurales de los materiales y el fondo.
Proporcional las condiciones suficientes para la estabilidad de las miestras, y suficientes para la estabilidad de lasmuestras, y suficientes significa proteger las muestras de decaimiento, degradación, corrosión o contaminación dentro de la escala de tiempo de la observación.
Ajustar la muestra a los requisitos ópticos del sistema de imagen del microscopio para proveer de las condiciones optimas de contraste y resolución, y evitar artefactos ópticos que pudieran aparecer y que oscurecieran la imagen o incorporaríanfalsos detalles.

Técnicas de preparación para luz transmitida
Las muestras biológicas pueden ser examinadas en muchos estados como combinación de los siguientes:
Vivas o muertas
Frescas o preservadas/fijadas
Enteras o en secciones
Tenidas o sin teñir
Hidratadas o deshidratadas
Opacas o aclaradas

Las muestras lo suficientemente pequeñas como para ser observadas enteras pueden tambiénser observadas vivas, obteniéndose el contraste mediante dispositivos ópticos tales como contraste de fases o contraste interferencial u, ocasionalmente, por medio de tintes vivos (tinciones no tóxicas que tienen afinidad por ciertos componentes celulares).











Montajes temporales de muestras vivas enteras
Las muestras que son organismos completos o partes de organismosvivientes requieren un tratamiento especial, tanto para mantenerlos vivos durante la observación, como para asegurar que su muerte no destruya información de interés.
Las muestras examinadas al microscopio mientras están vivas suelen ser pequeñas: organismos completos como bacterias, protozoos y pequeños animales y plantas, o partes discretas de organismos como células en cultivo,células sanguíneas, granos de polen, etc.
Montajes temporales de muestras vivas enteras
Las muestras aquí señaladas estarán montadas, normalmente, en el medio en que se dan habitualmente o serán cultivadas, por eso las técnicas de preparación se limitan a montarlas en un portaobjetos, bajo un cubreobjetos, en una pequeña gota de medio.
Si la observación va a ser prolongada puede sernecesario retardar la evaporación sellando los bordes del cubreobjetos.

Montajes permanentes de muestras no vivas
Fijación
Deshidratación e inclusión
Corte
Tinción Montaje

Montajes permanentes de muestras no vivas
Fijación:
Los organismos de los cuales se van a obtener montajes permanentes deben estar necesariamente muertos y se debe tener mucho cuidado en que el sacrificio seproduzca en condiciones humanitarias y con la menor alteración posible de la estructura.
Tan pronto como sea posible después de la muerte y, en algunos casos, simultáneamente, los tejidos deben ser fijados, un proceso que mata las células, inactiva sus enzimas, y precipita y entrecruza las moléculas que están en solución o suspensión dentro de las células.

Todas estas accionesestabilizan la estructura frente a daños en el procesado posterior.
La fijación también debe actuar como preservativo frente al ataque microbiano y puede mejorar la afinidad de la muestra por ciertas tinciones.
La fijación se lleva a cabo generalmente por tratamiento químico aunque en ciertas circunstancias se puede usar la fijación física por calentamiento o por congelación rápida....