Prevencion del delito
Páginas: 8 (1970 palabras)
Publicado: 18 de septiembre de 2009
INMUNOFLUORESCENCIA
En 1941 Albert Coons intentó conjugar los anticuerpos con colorantes fluorescentes y en 1944, publicó la primera aplicación de esta técnica inmunológica; mostró que era factible marcar los anticuerpos con moléculas que tienen la propiedad fluorescente. Las moléculas fluorescentes absorben luz de una longitud de onda (excitación) y emiten luz de otra longitud de onda(emisión). Si las moléculas de anticuerpo se marcan de un color fluorescente, o fluorocromo, los complejos inmunitarios que contienen estos anticuerpos marcados con fluorescencia (AF) pueden detectarse por la emisión de luz de color cuando se excita con una luz de longitud de onda apropiada. Es posible observar de manera similar moléculas de anticuerpo unidas a antígeno en célula o cortes detejido. La luz emitida puede verse en un microscopio de fluorescencia, que esta equipado con una fuente de luz UV
La microscopia de inmunofluorescencia es una técnica inmunohistoquímica que consiste en conjugar colorantes fluorescentes (isotiocianato de fluoresceína, rodamina B de lisamina o ácido 1-dimetilaminonaftalen-5-sulfónico) con anticuerpos o antígenos, exponiendo después esteconjugado a los anticuerpos o antígenos correspondientes en cortes de tejidos, frotis de microorganismos o de células, o cultivo de tejidos en capa única.
Cuando la reacción es positiva y se expone a la luz ultravioleta se producirá fluorescencia observable bajo el microscopio de inmunofluorescencia
En esta técnica que se conoce suelen emplearse compuestos fluorescentes como:
•Fluoresceína: un colorante orgánico que es el marcador más utilizado para procedimientos de inmunofluorescencia, absorben luz azul (490 nm) y emiten una fluorescencia verde a amarillo intensa (517 nm)
• Rodamina: otro colorante orgánico, absorbe en los límites de verde y amarillo (515 nm), y emite una fluorescencia roja intensa (546 nm). Ya que emite una longitud de onda más larga que lafluoresceína, puede usarse en prueba de inmufluorescencia de dos colores
Un anticuerpo específico para un determinante se marca con fluoresceína y un anticuerpo que reconoce un antígeno distinto, con rodamina. La localización de un anticuerpo marcado con fluoresceína es visible por su color verde amarillo, fácil de distinguir del color rojo que se emite donde el anticuerpo marcado con rodamina se unió.La conjugación de fluoresceína a un anticuerpo y la de rodamina a otro anticuerpo permite, por ejemplo, observar al mismo tiempo dos antígenos de membrana celular diferentes en la misma célula.
Pero también otras sustancias muy fluorescentes, por ejemplo:
• Ficoeritrina: un pigmento de color muy intenso y muy fluorescente obtenido de algas. Es un absorbente eficiente de luz(~30 veces más que la fluoresceína) y un emisor brillante de fluorescencia roja, lo que estimula su uso amplio como un marcador para inmunofluorescencia
Estas moléculas pueden conjugarse en la región Fc de una molécula de anticuerpo sin afectar la especificidad de mismo. Cada uno de los fluorocromos que se mencionaron absorben luz en una longitud de onda y emiten luz a una longitud deonda más larga
La inmunofluorescencia se aplica para
• Identificar varias subpoblaciones de linfocitos, en especial las de células T CD4+ CD8+.
• También es adecuada para identificar especies bacterianas
• Detectar complejos Ag-Ac en la enfermedad autoinmunitaria
• Descubrir componentes de complemento en tejidos
• Localizar hormonas y otros productos celularesin situ.
• Detectar y medir los anticuerpos contra ciertos microorganismos, tales como Coxiella burnetii, Rickettsii o virus de la garrapata de Colorado
**De hecho una aplicación mayor de la técnica de anticuerpo fluorescente es la localización de antígenos en cortes de tejido o en comportamientos subcelulares. Como puede utilizarse para mapear la localización real del antígeno...
En 1941 Albert Coons intentó conjugar los anticuerpos con colorantes fluorescentes y en 1944, publicó la primera aplicación de esta técnica inmunológica; mostró que era factible marcar los anticuerpos con moléculas que tienen la propiedad fluorescente. Las moléculas fluorescentes absorben luz de una longitud de onda (excitación) y emiten luz de otra longitud de onda(emisión). Si las moléculas de anticuerpo se marcan de un color fluorescente, o fluorocromo, los complejos inmunitarios que contienen estos anticuerpos marcados con fluorescencia (AF) pueden detectarse por la emisión de luz de color cuando se excita con una luz de longitud de onda apropiada. Es posible observar de manera similar moléculas de anticuerpo unidas a antígeno en célula o cortes detejido. La luz emitida puede verse en un microscopio de fluorescencia, que esta equipado con una fuente de luz UV
La microscopia de inmunofluorescencia es una técnica inmunohistoquímica que consiste en conjugar colorantes fluorescentes (isotiocianato de fluoresceína, rodamina B de lisamina o ácido 1-dimetilaminonaftalen-5-sulfónico) con anticuerpos o antígenos, exponiendo después esteconjugado a los anticuerpos o antígenos correspondientes en cortes de tejidos, frotis de microorganismos o de células, o cultivo de tejidos en capa única.
Cuando la reacción es positiva y se expone a la luz ultravioleta se producirá fluorescencia observable bajo el microscopio de inmunofluorescencia
En esta técnica que se conoce suelen emplearse compuestos fluorescentes como:
•Fluoresceína: un colorante orgánico que es el marcador más utilizado para procedimientos de inmunofluorescencia, absorben luz azul (490 nm) y emiten una fluorescencia verde a amarillo intensa (517 nm)
• Rodamina: otro colorante orgánico, absorbe en los límites de verde y amarillo (515 nm), y emite una fluorescencia roja intensa (546 nm). Ya que emite una longitud de onda más larga que lafluoresceína, puede usarse en prueba de inmufluorescencia de dos colores
Un anticuerpo específico para un determinante se marca con fluoresceína y un anticuerpo que reconoce un antígeno distinto, con rodamina. La localización de un anticuerpo marcado con fluoresceína es visible por su color verde amarillo, fácil de distinguir del color rojo que se emite donde el anticuerpo marcado con rodamina se unió.La conjugación de fluoresceína a un anticuerpo y la de rodamina a otro anticuerpo permite, por ejemplo, observar al mismo tiempo dos antígenos de membrana celular diferentes en la misma célula.
Pero también otras sustancias muy fluorescentes, por ejemplo:
• Ficoeritrina: un pigmento de color muy intenso y muy fluorescente obtenido de algas. Es un absorbente eficiente de luz(~30 veces más que la fluoresceína) y un emisor brillante de fluorescencia roja, lo que estimula su uso amplio como un marcador para inmunofluorescencia
Estas moléculas pueden conjugarse en la región Fc de una molécula de anticuerpo sin afectar la especificidad de mismo. Cada uno de los fluorocromos que se mencionaron absorben luz en una longitud de onda y emiten luz a una longitud deonda más larga
La inmunofluorescencia se aplica para
• Identificar varias subpoblaciones de linfocitos, en especial las de células T CD4+ CD8+.
• También es adecuada para identificar especies bacterianas
• Detectar complejos Ag-Ac en la enfermedad autoinmunitaria
• Descubrir componentes de complemento en tejidos
• Localizar hormonas y otros productos celularesin situ.
• Detectar y medir los anticuerpos contra ciertos microorganismos, tales como Coxiella burnetii, Rickettsii o virus de la garrapata de Colorado
**De hecho una aplicación mayor de la técnica de anticuerpo fluorescente es la localización de antígenos en cortes de tejido o en comportamientos subcelulares. Como puede utilizarse para mapear la localización real del antígeno...
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