Producción Y Aplicación De Anticuerpos Monoclonales

Producción y aplicación de Anticuerpos Monoclonales
Antecedentes
En 1975 Georges Köhler y César Milstein fusionaron por primera vez linfocitos B con células de un mieloma y obtuvieron un hibridoma: una línea celular inmortal capaz de producir anticuerpos específicos (monoclonales). La importancia de la producción de anticuerpos monoclonales no se evidenció hasta 1987 cuando estos anticuerposse produjeron en forma regular en ratones y fueron utilizados en el diagnóstico ya que son anticuerpos de pureza excepcional capaces de reconocer y unirse a un antígeno específico.
Anticuerpos Monoclonales
Anticuerpos: Los anticuerpos son proteínas que se unen a un antígeno, se encuentran en la membrana plasmática de las células B y son secretados por las células plasmáticas.
Anticuerposmonoclonales: Un anticuerpo monoclonal es un anticuerpo homogéneo producido por una célula híbrida producto de la fusión de un clon de linfocitos B y una célula tumoral.
La técnica de producción de hibridomas precisa líneas celulares de mieloma cultivadas que crecen en un medio de cultivo normal, pero no en un medio de “selección” definido, ya que no poseen los genes funcionales que se necesitan para lasíntesis de ADN en este medio de selección. La fusión de células normales con las células de mieloma defectuosas proporciona los genes necesarios a las células normales, de manera que sólo los híbridos celulares somáticos crecerán en el medio de selección. Es más, la propiedad de crecimiento incontrolado que poseen las células del mieloma hace que estos híbridos sean inmortales. Las líneascelulares de mieloma se pueden utilizar como parejas de fusión se crean mediante la inducción de defectos en los pasos de la síntesis de nucleótidos. Las células animales normales sintetizan nucleótidos de purina y timidilato, ambos precursores del ADN, a través de una vía de novo que requiere tetrahidrofolato. Los fármacos antifolato, como aminopterina, bloquean la activación del tetrahidrofolato,inhibiendo por tanto la síntesis de purinas e impidiendo la síntesis de ADN por esta vía de novo. Las células tratadas con aminopterina pueden emplear una vía alternativa en la que la purina se sintetiza a partir de hipoxantina administrada de forma exógena, por la acción de la enzima hipoxantina-guanina fosforribosiltransferasa (HGPRT) y el timidilato se sintetiza a partir de la timidina por laenzima timidina cinasa (TK). Por consiguiente, las células crecen normalmente en presencia de aminopterina si el medio de cultivo también contiene hipoxantina y timidina (medio HAT). Las líneas celulares de mieloma se pueden hacer defectuosas en HGPRT o en TK generando mutaciones, seguido de la selección en un medio que contenga sustratos para estas enzimas que den lugar a productos letales. Sólo lascélulas con deficiencia de HGPRT o TK sobrevivirán bajo estas condiciones de selección. Estas células de mieloma HGPRT o TK negativas no pueden utilizar la vía alternativa y, por tanto, morirán en un medio HAT. Si los linfocitos B normales se fusionan con las células HGPRT o TK negativas, los linfocitos B proporcionarán las enzimas necesarias para que los híbridos sinteticen ADN y crezcan en unmedio HAT.
Para producir un anticuerpo monoclonal específico para un antígeno definido, se inmuniza a una rata o un ratón con dicho antígeno y se aíslan linfocitos B del bazo o los ganglios linfáticos del animal. Estos linfocitos B se fusionan a continuación con la línea celular inmortalizada. Las líneas de mieloma son la mejor pareja de fusión para los linfocitos B porque células similares tienden afusionarse y formar híbridos estables de una manera más eficiente que las células que no se asemejan. Actualmente, las líneas de mieloma que se emplean no producen sus propias inmunoglobulinas y la fusión celular se consigue con polietilenglicol. Se seleccionan los híbridos que crezcan en un medio HAT; bajo estas condiciones, las células de mieloma HGPRT o TK negativas no fusionadas mueren...