Promotoras ambientales




























Villahermosa, Tab., Enero 2014








Práctica No.

1


Título de la Práctica:
DETERMINACIÓN DE GLUCOSA SANGUINEA

Fecha de realización:
FEB-2014

Ubicación:
Determinar glucosa.

Unidad: I Temas: 1.1.3


Determinar elvalor de glucosa en una muestra sanguínea y compararlo con el valor de referencia.


1.- OBJETIVO DE LA PRÁCTICA:

Aplicar la metodología para la determinación de glucosa así como las fórmulas para obtener la concentración por d.

2.- INTRODUCCIÓN:

La determinación de los niveles de glucosa fue el primer procedimiento empleado en el laboratorio clínico médico. La metodología deglucosa-oxidasa fue introducida por Keilin y Hartree en 1948. Más tarde Keston reportó el uso de un reactivo combinando glucosaoxidasa-peroxidasa, seguido por el de Teller adicionando un reactivo cromogénico al procedimiento de Keston. En particular, el método del reactivo de glucosa Stanbio está basado en la técnica
Descrita por Trinder et al.


3.- FUNDAMENTO DEL MÉTODO
La glucosa es oxidada enpresencia de glucosa oxidasa (GOD). El peróxido de hidrogeno formado, reacciona bajo la influencia de peróxidasa (POD) con fenol y 4-aminoantipirina para formar un complejo rojo-violeta de quinona. La intensidad del color es proporcional a la concentración de glucosa.

Glucosa + O2 + H2O2 GOD Acido Glucónico + H2O2

H2O2+4-Aminoantipirina+Fenol POD Complejo quinona4.- MATERIALES A UTILIZAR:
CANTIDAD
DESCRIPCIÒN
4
Gradillas
4
Tubos de ensaye sin anticoagulante
4
Torundas de algodón con alcohol
4
Vac









5.- EQUIPO A UTILIZAR:
CANTIDAD
DESCRIPCIÒN
1
Espectrofotómetro
1
Pipeta automática de 1000 µl
1
Pipeta automática de 10µl

6.- MATERIAL BIOLÓGICO
CANTIDAD
DESCRIPCIÒN
3 ml.
Sangre sin anticoagulante7.- REACTIVOS:
CANTIDAD
DESCRIPCIÒN
1
Kit para determinación de glucosa






8.- RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA (MATERIAL BIOLÓGICO):
Sangre Venosa
Se extrae sangre venosa por las técnicas conocidas y se deposita en un tubo de ensaye sin anticoagulante y se deja coagular.



9.- DESCRIPCIÓN DE LA PRÀCTICA

1.- Una vez coagulada la sangre, el tubo se centrifugaa 2000 rpm por 5 min.
2.- Se separa el suero del sedimento y se coloca en otro tubo de ensaye.
3.- Coloca en cada cubeta los siguientes volúmenes.


Blanco
Estándar
Muestra
Reactivo
1.0 ml
1.0ml
1.0 ml
Estándar

10µl

Muestra


10µl

4.- Incube las muestras a 37°C durante 5 min. O temperatura ambiente durante 10 min.
5.- lee las absorbancias de cada cubeta a 540 nm conayuda del espectrofotómetro.
6.- Determina el valor de glucosa en mg/dL con la siguiente formula.


(A) muestra
Glucosa= X 100
(A) patrón


7.- Reporta el valor obtenido y compáralo con el valor de referencia:
Glucosa 70-110 mg/dL.

10.- INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Los valores bajos en la determinación de glucosason denominados hipoglucemia causado por la poca ingesta de carbohidratos entre otras.
Los valores elevados son denominados como hiperglucemia y puede deberse a que el paciente no cumplió con lo requerido sobre la ingesta de alimentos antes del estudio, por lo que se tiene que repetir.





11.- OBSERVACIONES

Hay que lavar y secar correctamente las cubetillas que se utilizaran paramedir absorbancias, de igual manera pipetear correctamente las cantidades a los tubos.




12.- NOTAS IMPORTANTES

Es importante que el suero a utilizar este libre de eritrocitos o no hemolizado.


13.- ACTIVIDADES

Anota tus resultados.
Informa tus resultados
comenta conclusiones con tus compañeros.
Contesta el siguiente cuestionario.
Completa el glosario de términos....