PRUEBAS BIOQUIMICAS

TSI (TRES AZUCARES-HIERRO)
FUNDAMENTO: Es una prueba usada para la fermentación de la glucosa, lactosa y sacarosa y la producción de H2S por parte de la bacteria sumándole producción de gas. El cambio de color rojo-anaranjado (color inicial del medio) a amarillo indica fermentación. Si se fermenta únicamente la glucosa el cambio de color del medio ocurre solamente en el fondo debido a que seencuentra 10 veces menos concentrada que la sacarosa y la lactosa, además los radicales libres no son suficientes para hacer virar el medio.
Si se fermentan los 3 azucares hay cambio de color tanto en la superficie como en el fondo. La presencia de burbujas que rompen el medio y a veces tienden a expulsarlo indica presencia de gas como producto final de la fermentación.
La producción de H2S semanifiesta por la aparición de un precipitado color negro debido a la reducción de la sal de hierro presente en el medio.
Esta es una prueba específica para la identificación a nivel de género en la familia Enterobacteriaceae, con objetivo de diferenciar entre:
Bacterias fermentadoras de la glucosa
Bacterias fermentadoras de la lactosa
Bacterias fermentadoras de sacarosa
Bacterias aerogénicasBacterias productoras de SH2 a partir de sustancias orgánicas que contengan azufre.
TÉCNICA: Inocular el medio realizando siembra mixta del microorganismo en estudio, incubar a 37 grados C por 24 horas.
INTERPRETACIÓN:
• A: Reacción acida. Color amarillo
• A/A: Fermentación 3 azucares
• K: Reacción alcalina. Color roja naranja
• K/A: Fermentación de la glucosa
• Burbujas:Producción de gas
• K/K: No hay fermentación de los 3
• Precipitado negro: Formación H2S

Resultados:
• Pico alcalino/fondo alcalino: no hay fermentación de azucares. Característica de bacterias no fermentadoras como Pseudomonas sp.
• Pico alcalino/fondo ácido: Glucosa fermentada,lactosa ni sacarosa fermentadas. Shigella spp.
• Pico alcalino/fondo negro: Glucosafermentada, ni lactosa ni sacarosa fermentada, producción de ácido sulfhídrico. Salmonela spp.
• Pico ácido/fondo ácido: Glucosa y lactosa y/o sacarosa fermentadas. Puede producirse SH2 o no. Escherichia coli.
A estos resultados se les agrega el resultado de la producción de gas.


LIA (LISINA-HIERRO)
FUNDAMENTO: Es un medio que sirve para demostrar la producción de dos enzimas: la lisinadescarboxilasa y la lisina desaminasa, además la presencia de sales de hierro sirve para detectar la producción de H2S por algunos microorganismos.
La descarboxilacion de la lisina ocurre en ambiente anaeróbico o sea en el fondo del tubo y se pone de manifiesto por la alcalinización del medio produciendo un viraje del indicador púrpura de bromocresol. La presencia de glucosa en los componentes del LIAdetermina primero una reacción de fermentación, produciendo acidificación y cambio de color del medio a amarillo y el pH favorable para la reacción de descarboxilacion que ocurre después, volviendo a su color violeta original la parte del fondo del tubo.
La desaminacion de la lisina que se puede producir por los géneros Proteus y Providencia tiene lugar en la parte superior del tubo produciendoacido a cetocarbonico que al combinarse con la sal de hierro y en presencia de oxigeno forma un color violeta rojizo. La producción de H2S se evidencia por la presencia de un precipitado negro por utilización de las sales de hierro.
TÉCNICA: Inocular realizando siembra mixta con doble picadura a partir de una colonia del cultivo del microorganismo en estudio e incubar 24 horas a 37 grados CINTERPRETACIÓN:
• A: Reacción acida. Color amarillo
• K: Reacción alcalina. Color violeta
• R: Reacción alcalina: color rojo
• K/K: Descarboxilacion lisina
• K/A: Fermentación glucosa. Descarboxilacion lisina
• R/A: Desaminacion lisina. Fermentación glucosa


MOTILIDAD
FUNDAMENTO: Me permite determinar la capacidad de movimiento por parte de un microorganismo.
TÉCNICA: Siembra en...