Pruebas Bioquimicas

PRUEBAS BIOQUIMICAS SIMULTÁNEAS
1. MACROTÉCNICAS
Existen sistemas multipruebas que permiten realizar varias pruebas bioquímicas simultáneamente, facilitando notablemente la identificación del microorganismo. Estos sistemas son los siguientes:
* Agar-Hierro-Kligler AHK.
* Agar-Hierro-Triple azúcar AHTA o TSI.
* Agar-Sulfuro-Indol-Motilidad ASIM.
* IMVIC.

*AGAR-HIERRO-KLIGLER AHK O KID

Se pueden realizar tres pruebas a la vez:
a) Utilización de azucares, glucosa y lactosa.
b) Producción de gas.
c) Producción de ácido sulfhídrico.
Estas pruebas se utilizan para la identificación de enterobacteriáceas según su capacidad de metabolizar o no la lactosa.
Cuando un microorganismo utiliza como fuente primaria de carbono los azucares, se acidifica el medio,porque se forman ácidos orgánicos. Si no utilizan o no tienen en el medio hidratos de carbono, utilizan proteínas que alcalinizan el medio por la formación de aminas. Las proteínas en condiciones de aerobiosis se metabolizan mejor por la vía de la descarboxilacion oxidativa de los aminoácidos que en anaerobiosis.
La glucosa se metaboliza mejor que la lactosa porque la estructura molecular de laglucosa es más sencilla que la de la lactosa. Para que se metabolice la lactosa el microorganismo debe tener el enzima B-D Galactosidasa.

TABLA N° 1 Materiales y Reactivos a utilizar para llevar a cabo las pruebas de Agar-Hierro-Kligler AHK.

MATERIALES | REACTIVOS |
Tubos de cultivo | Agar-Hierro-Kligler |
Hilo o Asa | |
Pipeta de 10 ml | |
Algodón graso | Miroorganismo |Mechero | |
Estufa de cultivo | |

Técnica:
a) De una colonia de microorganismo puro y joven, con un asa se recoge el centro de la colonia.
b) Inocular por picadura y estría un tubo de cultivo con medio AHK en pico de flauta.
c) Incubar 18-24 horas a 37 °C. Leer justamente a las 18-24 horas, si se leyera antes puede que no se haya producido la suficiente fermentación de la glucosay la lactosa para formarse medio acido capaz de hacer virar el indicador (rojo de fenol) del medio. Si se leyera más tarde de las 24 horas podría dar un resultado falso alcalino pues el microorganismo habría utilizado la peptona.
Interpretación de los resultados:
* Cambios de pH:
Se observaran por el cambio de color del medio de cultivo. Aparecen 2 partes en el tubo, la superficial y lainterior en el fondo (glucosa) y en la zona inclinada (lactosa) pudiendo ocurrir las siguientes situaciones:
a) Fermentación de los azucares: fermentación solamente de la glucosa+lactosa: zona profunda amarillo (reacción acida), zona superficial roja (reacción alcalina).
Si aparece primeramente acidificación del medio por la producción de acidos a partir de la glucosa, el medio de cultivo sepresenta inicialmente de color amarillo entero, pero posteriormente aparece el color naranja en la superficie del tubo, debido a la alcalinización de la superficie del medio causada por las aminas que provienen de la descarboxilacion oxidativa de los aminoácidos que forman la peptona.
El microorganismo utiliza primero la glucosa y cuando esta se ha agotado, utiliza como fuente de carbono lapeptona. Este microorganismo metaboliza la glucosa.
b) Fermentan glucosa y lactosa + zona inclinada y zona profunda amarillas.
Se acidifica el medio tanto en la superficie inclinada como en el interior del tubo color amarillo del medio. Estos microorganismo metabolizan glucosa y lactosa.
c) No metabolizan ni lactosa ni glucosa: Glucosa- y lactosa- : aparece color rojo en el fondo y en lasuperficie del tubo inclinado (reacciones alcalinas).
En los microorganismos aerobios el tubo aparece color naranja en la superficie inclinada debido a la alcalinización del medio ocasionada por la utilización de la peptona, y en la capa profunda no aparece cambio de color por no poderse desarrollar en ausencia de oxígeno
En los microorganismos anaeróbicos facultativos se alcaliniza el medio tanto...