pruebas bioquimicas

Pruebas bioquímicas de
identificación

Pruebas de Identificación
rápidas
1.Prueba de la catalasa
2.Prueba de la coagulasa
3.Prueba de PYR
4.Prueba de oxidasa

Pruebas de Identificación para
Cocos Gram +
1.
2.
3.
4.
5.
6.

DNasa
Prueba del manitol salado
Bilis esculina
CAMP
Hidrólisis del hipurato
Voges –Proskauer

Pruebas de sensibilidad a ATB
1.
2.
3.

Disco de Optoquina
Disco de novobiocinaDisco de Bacitracina

catalasa

Prueba de la catalasa
Fundamento: Detecta la presencia de la enzima
catalasa.
Procedimiento: En portaobjetos colocar sobre una
colonia unas gotas de H202 3 %.
H202
H20 + 02
Liberación de burbujas rápida y sostenida indica la
producción de oxígeno molecular = prueba (+)
Consideraciones:
No Agar sangre (peroxidasa en los eritrocitos).

coagulasa

Prueba de lacoagulasa
Fundamento: Detecta un factor de agregación “clumping factor” en la
superficie de la bacteriana.
Procedimiento: se coloca una colonia sospechosa de pertenecer a
una especie de Staphylococcus y se emulsifica en una gota de
plasma de conejo.
Interpretación: “arracimamiento” bacteriano en 1 minuto = prueba
(+).
Si el resultado es negativo ensayar la producción de coagulasa en
tubo.Consideraciones:

Utilizar plasma con
EDTA y no citratado, ya que organismos capaces de metabolizar el
citrato (Enterococcus spp.) pueden dar resultados falsos (+).
Las pruebas (-) luego
de 4 hs de incubación a 35ºC, dejar a temperatura ambiente y leer
luego de 18-24 hs a fin de evitar la fibrinólisis que producen
algunas cepas al ser incubadas en forma prolongada a 35ºC.

Prueba de PYR

Prueba del PYR:Fundamento: detecta la enzima pirrolidonil arilamidasa se utiliza
como sustrato el reactivo L-pirrolidonil- beta-naftilamida (PYR), para
la identificación rápida de enterococos.
Procedimiento: Realizar un alto inóculo (2 MacFarland) e introducir
un disco de PYR.
Tiempo y Tº de incubación: 30 minutos a 35º C.
Tiempo de lectura: 5 minutos.
Interpretación:
Disco rosado o rojo (+)
Disco y/o soluciónamarillo a incoloro (-).
Consideraciones: Algunas especies de Staphylococcus y los
estreptococos del grupo A dan, también, una prueba positiva.

DNAsa

Prueba de la DNAsa
Fundamento: El S. aureus produce una DNAasa
termoestable que hidroliza DNA. La producción de
DNAsa puede determinarse incorporando ácido
desoxirribonucleico (DNA) en agar nutritivo .
Procedimiento: Se inocula el microorganismo enmanchas densas sobre agar DNA y después de 18 a 24
hs de incubación. Revelar con HCl al 1%, que precipita
el DNA nativo del medio.
Interpretación: colonias rodeadas por una zona clara
donde el ADN ha sido despolimerizado e hidrolizado =
prueba (+)

Manitol salado

Agar Manitol salado
Fundamento: el medio contiene manitol (1%), cloruro de sodio (7,5
%), rojo de fenol y peptonas.
Procedimiento:Sembrar la cepa e incubar 18 a 24 hs a 35ºC.
Interpretación:
Crecimiento y viraje
S. aureus
Crecimiento sin viraje.
S. epidermidis
Consideraciones:
La alta concentración de sal inhibe otros microorganismos excepto
enterococos (por lo tanto usar la placa para identificación, no para
aislamiento).

Bilis Esculina

Prueba de la bilis-esculina:
Fundamento: Se basa en la capacidad de ciertas bacterias(estreptococos del grupo D) para hidrolizar la esculina en presencia
de 1-4% de sales biliares.
Procedimiento: Se inocula el microorganismo en la superficie de
un pico de flauta. Incubar 24 hs.
Interpretación: La beta glucosidasa escinde la esculina en glucosa
y esculetina. Esta ultima es soluble en el medio y forma un
complejo de color negro con Fe 3+ .La hidrólisis de esculina se
observa como unoscurecimiento del medio (color negro) en 24 hs
de incubación a 35ºC, raramente se requieren 48 hs de incubación
hasta que la hidrólisis sea aparente.
Consideraciones: Es importante que el medio contenga 40% de
bilis, ya que algunos productos contienen menos cantidad lo que
lleva a confundir algunos estreptococos viridans con enterococos

Prueba de CAMP
Fundamento: Los estreptococos grupo B...