punto isolectrico

DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOELÉCTRICO DE LA CASEÍNA

I. EL PROBLEMA
Determinar el punto isoeléctrico de la caseína.
II. HIPÓTESIS
Las proteínas están formadas por multitud de aminoácidos unidos mediante enlaces peptídicos y la carga va a depender de los grupos ionizables que poseen los aminoácidos que la componen y del pH del medio.
III. INTRODUCCIÓN
PUNTO ISOELÉCTRICO
Todas lasmacromoléculas de la naturaleza adquieren una carga cuando se dispersan en agua. Una característica de las proteínas y otros biopolímeros es que la carga total que adquieren depende del pH del medio.
Así, todas las proteínas tienen una carga neta dependiendo del pH del medio en el que se encuentren y de los aminoácidos que la componen, así como de las cargas de cualquier ligando que se encuentre unido ala proteína de forma covalente (irreversible).
Debido a la composición en aminoácidos de la proteína, los radicales libres pueden existir en tres formas dependiendo del pH del medio: catiónicos, neutros y aniónicos.
Cualquier proteína tendría una carga neta positiva si se encuentra en un medio lo suficientemente ácido debido a que los grupos COOH de los aminoácidos aspártico y glutámico estaríanen su forma neutra pero los grupos amino de Arginina y lysina estarían protonados (-NH3 +).
De igual forma si la proteína se encuentra en un medio con un pH muy alto estaría cargada negativamente ya que en este caso los grupos carboxilo estarían desprotonados (COO -) y los grupos amino estarían en su forma neutra (NH2).
De lo anterior se deduce que las proteínas tienen un pH característico alcual su carga neta es cero. A este pH se le denomina punto isoeléctrico (pI).
En el punto isoeléctrico (pI), se encuentran en el equilibrio las cargas positivas y negativas por lo que la proteína presenta su máxima posibilidad para ser precipitada al disminuir su solubilidad y facilitar su agregación.
Si suponemos una proteína formada únicamente por aminoácidos sin grupos laterales ionizables lacarga neta de la proteína dependería exclusivamente de la protonación / desprotonación de los grupos amino y carboxilo terminal. En la realidad las proteínas están formadas por multitud de aminoácidos unidos mediante enlaces peptídicos y la carga va a depender de los grupos ionizables que poseen los aminoácidos que la componen (anexo I) y del pH del medio.
IV. MÉTODO OPERATIVO
a. Calentar en bañoa 40°C, la muestra y las soluciones buffer; e implementar el siguiente sistema.


REACTIVOS
TUBOS

I
II
III
Leche
5.0 ml
5.0 ml
5.0 ml
Buffer Acetato pH 2,0
5.0 ml
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Buffer Acetato pH 4,8
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5.0 ml
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Buffer Acetato pH 10,0
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5.0 ml







b. Mezclar y observar el grado de precipitación en cada tubo y anotar usando cruces (+) de acuerdo a laintensidad.
c. Valorar el pH de cada uno de los tubos utilizando un Potenciómetro; para lo cual deberá trasvasarse el contenido de los respectivos tubos a vasos de precipitación de 50 ml; luego proceder a medir el pH correspondiente a cada tubo.
d. Agregar IV gotas de fenolftaleína a cada uno de los tres tubos del sistema anterior y agregar solución de NaOH al 10% hasta la apariencia ligera, decolor grosella.
Observar el aspecto de solubilidad en cada tubo y anotar.
e. Interpretar los resultados de cada uno de los tubos, indicando los parámetros de referencia utilizados para determinar el pI (punto isoeléctrico) de la proteína de la leche (caseína).
f. Establecer el Tubo experimental que contiene el pI de la caseína e inferior las propiedades diferenciales que presenta en esepH.
g. Explicar, para que se agregó el NaOH al 10% en cada tubo y que propiedades presenta en ese estado la proteína (caseína)?
h. Explique de cómo fue la evolución de la polaridad de caseína durante el proceso experimental total?
V. RESULTADOS
Al agregarle 0.4 ml de NaoH al vaso 1, este se hace más soluble.
En el vaso número 2 se agrega 0,2 ml de NaoH sin encontrar resultado alguno ya...