Determinacion Del Punto Isolectrico De La Caseina

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES LABORATORIO BIOQUÍMICA

Alumno: _______________________________________ Código: _________________ Alumno: _______________________________________ Código: _________________
Práctica 8: DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOELÉCTRICO DE LA CASEÍNA. OBJETIVO: 1. Aplicar una técnica semi-cuantitativa para determinar el pI de la caseína.

1. FUNDAMENTO TEÓRICO La caseínarepresenta el 80% de las proteínas presentes en la leche y el 2,7% en composición de la leche líquida. La caseína es una proteína conjugada de la leche del tipo fosfoproteína que se separa de la leche por acidificación y forma una masa blanca.

En la caseína la mayoría de los grupos fosfato están unidos por los grupos hidroxilo de los aminoácidos serina y treonina. La caseína en la leche se encuentraen forma de sal cálcica (caseinato cálcico).

Todas las macromoléculas de la naturaleza adquieren una carga cuando se dispersan en agua. Una característica de las proteínas es que la carga total que adquieren depende del pH del medio. Todas las proteínas presentan una carga neta que depende de su secuencia primaria y que varía dependiendo del pH al cual se encuentra la molécula. Todas lasproteínas tienen un pH característico en el cual presentan una carga neta de cero, este pH es conocido como el pI (punto isoeléctrico) y es una de las propiedades de estas moléculas que es de gran utilidad tanto en la industria como en la investigación cuando se pretende utilizar o estudiar alguna proteína en particular. En el punto isoeléctrico (pI), se encuentran en el equilibrio las cargas positivasy negativas por lo que la proteína presenta su máxima posibilidad para ser precipitada al disminuir su solubilidad y facilitar su agregación.

2. SEGURIDAD DURANTE LA PRÁCTICA

2.1 Normas de seguridad Usar durante todo el desarrollo de la práctica los elementos de bioseguridad: Bata de laboratorio Guantes de nitrilo Gafas de seguridad

Mantener los elementos personales de seguridadidentificados y en buen estado. Está prohibido su intercambio con los demás compañeros de laboratorio. 2.3 Manejo de Residuos químicos Tanto por razones de seguridad como por respeto al medio ambiente, es importante disponer los residuos generados en las prácticas del laboratorio en forma adecuada. Por ello el estudiante debe: 1. Emplear los recipientes destinados para eliminar los residuos o desechos delaboratorio, los cuales están debidamente identificados según el tipo de sustancia a desechar. Verter únicamente los residuos en el recipiente correspondiente para evitar reacciones no controladas y potencialmente peligrosas.

2.

No arrojar por el desagüe los desechos o residuos químicos obtenidos durante el desarrollo de la práctica. Si tiene alguna inquietud al respecto comuníquela alresponsable del laboratorio, quien le indicará la forma correcta de hacerlo.

3. TRABAJO INTEGRADO DE LABORATORIO. CONSULTAS PREVIAS. 1. Observe el siguiente oligopéptido: Ala-Pr-Gly-His-His-Trp-Asn-Asp-Asn-Val-Glu, ¿cuál es su carga neta a pH 7? Explique:_____________________________ _____________________________________________________________________ 2. ¿Qué es el isoelectroenfoque? ¿En quéconsiste?__________________________ _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ 3. Complete la siguiente tabla:
PROTEINA Pepsina Albúmina de huevo 5.0 7.0 9.5 Hemoglobina pI

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4. METODOLOGIA 4.1 MATERIALES Tabla 1. Listado de materiales necesarios para el desarrollo de la práctica por pareja.ITEM Cantidad Gradilla 1 Tubos de ensayo medianos 16 Vaso de precipitados de 50mL 2 Varilla de agitación 2 Balón aforado de 50mL 1 Probeta de 50mL 1 Pipetas graduadas de 1, 5 y 10mL 2 Propipeta 1 Vaso de precipitados de 10 y 25 mL 2 Espátula 1 Papel indicador universal 1

4.2 REACTIVOS

Tabla 2. Listado de reactivos necesarios para el desarrollo de la práctica por pareja. Reactivos...