Quimica sanguinea°

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PRACTICA No. 1 “QUIMICA SANGUINEA”
* Urea /Bun – Color

Fundamento del método
La urea presente en la muestra origina, según las reacciones descritas a continuación un indofenol coloreado que se cuantifica espectrofotométricamente.
Urea + H20 ureasa 2NH4 + CO2

NH4 + Salicilato + NaCIO nitropusiato Indofenol

Composición
A1. Reactivo: Salicilato sódico 62mmol/L,nitropusiato sódico 3.4mmol/L, tampón fosfatos 20 mmol/L, pH6.9.
A2. Reactivo: ureasa > 500U/mL.
A. Reactivo: hipoclorito sódico 7mmol/L, hidróxido sódico 150mmol/L.
Irritante (Xi): R36/38: irrita los ojos y la piel, S26: En caso de contacto con los ojos, lávense inmediata y abundantemente con agua y acúdase a un médico, S37/39: Úseseguantes adecuados y protección para los ojos /la cara.
s. patrón de Glucosa/Urea/Creatinina: Glucosa 100mg/dL, urea 50mg/dL (8.3mmol/L, BUN 23.3 mg/dL), creatinina 2mg/dL. Patrón primario acuoso.

Conservación
Conservar 2-8ºC,
Los reactivos y el patrón son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, siempre que se conserven bien cerrados y se evite la contaminacióndurante su uso.
Indicaciones de deterioro:
* Reactivos: presencia de partículas, turbidez absorbancia del blanco superior a 0.250 a 600nm (cubeta de 1cm).
* Patrón: presencia de partículas y turbidez.




Preparación de los reactivos
Reactivo (B) y patrón (S): están listos para su uso.
Reactivo (A): Vaciar el contenido de un vial de reactivo A2 en un frasco de reactivo A1(nota 1) homogenizar. Si se desea preparar otros volúmenes, mezclar en la proporción: 1mL de reactivo A2 + 24mL reactivo A1. Estable dos meses de 2-8ºC (nota 2).

Equipo adicional
* Baño de agua a 37ºC.
* Analizador, espectrofotómetro o fotómetro para lecturas a 600 ± 20nm.

Muestras
Suero u plasma recogidos mediante procedimientos estándar. Diluir la orina 1/50 con aguadestilada antes del ensayo.
La urea en suero o plasma es estable 7 días de 2-8ªC. Se recomienda la heparina como anticoagulante.
A urea en orina es estable 3 días a temperatura ambiente si no se produce crecimiento bacteriano.

Procedimiento
1. Atemperar los reactivos a temperatura ambiente.
2. Pipetear en tubos de ensayo:
| Blanco | Patrón | Muestra |
Patrón de urea (S)Muestra Reactivo (A) | _ _ 1.0mL | 10L _ 1.0mL | _ 10L 1.0mL |

3. Agitar bien e incubar los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente (16-25ªC) o durante 5 minutos a 37ªC.
4. Pipetear:
5. Agitar bien e incubar los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente (16-25ªC) o durante 5 minutos a 37ªC.
6. Leer la absorbancia (A) del patrón y de la muestra a 600nm frente alblanco. El color es estable durante al menos de 2 horas.


Calculos
La concentración de urea en la muestra se calcula a partir de la siguiente formula general:
A muestraA patron x C Patron x Factor dilucion muestra=C muestra
Si se utiliza para calibrar el Patrón de Urea suministrado (Nota 3):
| Suero o plasma | Orina |
A muestraA patron | x 50 = mg/dL urea x 23.3 =mg/dL BUN x8.3 = mmol/L urea | x 2500 = mg/dL urea x 1165 =mg/dL BUN x 415 = mmol/L acido úrico |

Valores de referencia
Suero y plasma: 15-39mg/dL urea = 7-18mg/dL BUN = 2.5-6.5mmol/L urea. En el periodo neonatal las concentraciones son inferiores mientras que en personas mayores de 60 años se encuentran valores superiores en hombre que mujeres.
Orina: 26-43g/24h urea =12-20g/24h BUN =428-714mmol/24h urea.
Estos valores se dan únicamente a título orientativo; es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios intervalos de referencia.

PRACTICA No. 2 “QUIMICA SANGUINEA”

-Creatinina (Biosystems)-
FUNDAMENTO DEL METODO
La creatinina presente en la muestra reacciona con el picrato en el medio alcalino originando un complejo coloreado. Se mide la velocidad de formación de...
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