Rayos gamma

Conversión y reversión génica en Saccharomyces cerevisiae. Un modelo para el estudio del daño producido por radiación gamma
Lic. Damaris Moreno, Lic. Jorge L. Fuentes, Lic. Ángel Sánchez, Lic. Ligia Baluja y Lic. Enrique Prieto
 
Resumen
Se estudió la radiosensibilidad y la cinética de inducción de eventos de conversión y reversión génica en la cepa D7 de Sacharomyces cerevisiae frente aradiación gamma, en rangos de dosis entre 100-800 Gy y entre 50-300 Gy, respectivamente. Se utilizó una fuente de 60Co PX--30 con una tasa de dosis 49,43 Gy/min. La curva de supervivencia celular mostró un DL50 de 150 Gy. La cinética de muerte celular fue lineal con un ajuste superior a 98 %. La inducción de eventos de conversión génica fue significativa respecto al control a partir de 50 Gy. Porel contrario, la reversión génica fue significativa solo a partir de 200 Gy. En general, las frecuencias de eventos de conversión génica fueron superiores a las de reversión, esto sugiere que la radiación gamma induce preferentemente eventos recombinogénicos. Tanto para los eventos de conversión como de reversión génica se obtuvo una dependencia exponencial de la dosis de radiación gamma. Sediscutió sobre la utilidad relativa del ensayo para estudios de mutagénesis y antimutagénesis.
Palabras clave: Daño en el ADN, radiación gamma, conversión y reversión génica, Sacharomyces cerevisiae.
 
 

Las radiaciones ionizantes en su interacción con el ADN producen una variedad de daños, entre las que se encuentran: modificaciones de bases, rupturas de enlaces fosfodiéster de la hélice,uniones covalentes intracadenas e intercadenas y entre bases y proteínas.1 Muchas de estas alteraciones en la estructura de la hélice del ADN están directamente implicadas en eventos mutacionales y recombinogénicos y se le atribuye un papel determinante en la génesis de los procesos carcinogénicos y de envejecimiento de células humanas.2-4 En esta dirección, la estandarización de ensayos que sirvan debiosensores de daños genéticos producidos por agentes mutagénicos, constituyen un tema de investigación de actualidad y de gran importancia práctica.5
El ensayo de genotoxicidad con la cepa D7 de S. cerevisiae desarrollado por Zimmerman en 1975, permite medir 3 tipos de eventos génicos diferentes: entrecruzamiento mitótico, conversión y reversión génica. Dicho ensayo permite evaluar 2 niveles deexpresión del daño en el ADN (daño primario en el ADN y mutación génica) y su utilidad ha sido probada tanto para agentes químicos como físicos, incluidas las radiaciones ionizantes.6
Considerando el eventual uso de este ensayo en estudios de mutagénesis y antimutagénesis que utilicen radiación gamma como mutágeno, el presente trabajo tiene como objetivo caracterizar la inducción de eventos deconversión y reversión génica en la cepa D7 de S. cerevisiae frente a este tipo de tratamiento.
Métodos
Microorganismo y medios de cultivo
Fue utilizada la cepa D7 de S. cerevisiae desarrollada por Zimmerman7 en 1975 de genotipo a/, ade2-119/ade2-40, trp5-112/trp5-27, ile1-92/ile1-92. Esta cepa permite evaluar 3 eventos genéticos: entrecruzamiento mitótico, conversión y reversión génica. Lascélulas de levaduras conservadas en el medio descrito por Bronzetti8 en 1995 y con previo chequeo del genotipo, fueron crecidas a 32 ºC durante 72 h en medio completo (A) hasta fase estacionaria de crecimiento, centrifugadas a 4 000 rpm durante 15 min, lavadas y suspendidas en agua estéril. La suspención celular (4-5 x 108 células/mL) resultante, fue conservada a 8 ºC hasta su uso en los ensayos deconversión y reversión.
Irradiación
La irradiación se realizó en una fuente de 60Co, modelo PX--30M. Las células fueron irradiadas a diferentes dosis dependiendo del tipo de estudio, a una temperatura de 2 0,5 ºC. El valor de la tasa de dosis fue de 49,43 Gy/min, calculada con el dosímetro Fricke9 Luego de la irradiación las células fueron colocadas a 4 ºC hasta su uso.
Radiosensibilidad...