Reacción en cadena de la polimerasa

INTRODUCCIÓN

En los últimos tiempos la ingeniería genética a desarrollado diversas técnicas de ADN recombinantes útiles para obtener copias de ADN. Una de estas técnicas es la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), es una técnica automatizada in Vitro que permite a los investigadores obtener en pocas horas miles de copias a partir de un fragmento específico de ADN amplificándolo.La técnica PCR es una metodología rápida, especifica y muy sensible utilizada en laboratorios de investigación médica y biológica para una gran variedad de aplicaciones, entre ellas se incluyen la clonación de ADN, la detección y diagnóstico de enfermedades infecciosas, el diagnóstico de trastornos hereditarios, es usada en técnicas forenses para el reconocimiento de cuerpos, usada entest de paternidad entre otros.
Los productos amplificados de ADN obtenidos en la técnica PCR se analizan mediante separación electroforética en gel de agarosa, procedimiento mediante el cual es posible separar las copias de ADN, las cuales migrarán a través de un gel en un campo eléctrico dependiendo de su tamaño y carga.
Mediante el presente informe podremos comprender y conocer elfuncionamiento de esta técnica, los tipos de PCR existentes, materiales utilizados en este procedimiento, el uso de la electroforesis en este proceso y la importancia del uso de esta técnica y sus aplicaciones.

OBJETIVOS:
 Objetivo General:
Que el estudiante comprenda conceptos teóricos en los cuales se basa la reacción en cadena de la polimerasa
 Objetivos Específicos:
• Comprender elprocedimiento para realizar la técnica PCR
• Reconocer los problemas específicos de la PCR
• Aprender a recolectar la muestra de ADN

¿Qué es PCR?

La Reacción en cadena de la polimerasa, conocida como PCR , es una técnica de biología molecular descrita en 1985 por Kary Mullis, cuyo objetivo es obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN particular, partiendo de un mínimo; en teoríabasta partir de una única copia de ese fragmento.

Procedimientos de la técnica PCR

Ciclo de amplificación
La PCR básica consta de un primer paso de calentamiento hasta 94-95ºC durante 5-10 minutos, en el cuál se activa la ADN polimerasa, en caso de necesitarlo. Posteriormente tiene tres pasos que se repiten muchas veces dependiendo de lo que se valla a realizar.
1. Desnaturalización
En primerlugar, se desnaturaliza el ADN (se separan las dos hebras de las cuales está constituido). Este paso puede realizarse de diferentes modos, siendo el calentamiento (94-95ºC) de la muestra la forma más habitual. La temperatura a la cual se decide realizar la desnaturalización depende, por ejemplo, de la proporción de G+C que tenga la hebra, como también del largo de la misma. Otros métodos,raramente empleados, serían la adición de sales o agentes químicos capaces de realizar la desnaturalización.
2. Unión del cebador
A continuación se producirá la hibridación del cebador, es decir, el cebador se unirá a su secuencia complementaria en el ADN molde. Para esto es necesario que la temperatura descienda (generalmente, a 55 ºC, aunque se puede variar según sea el caso entre 45ºC y 65ºC). Estoscebadores actuarán como límites de la región de la molécula que va a ser amplificada.
3. Extensión de la cadena
Por último actúa el ADN polimerasa, tomando el ADN molde para sintetizar la cadena complementaria y partiendo del cebador como soporte inicial necesario para la síntesis de nuevo ADN. Se aumenta la temperatura hasta 72 ºC (para la Taq Polimerasa), temperatura a la cual el ADNpolimerasa presenta su máximo de actividad, aumentando geométricamente la cantidad de fragmentos de ADN en la muestra.
Una vez completados todos los ciclos, se finaliza con dos pasos, uno de extensión de la cadena a la temperatura óptima de la ADN polimerasa, normalmente 72ºC, para finalizar enfriando la muestra a 4ºC para su conservación.
Este ciclo (desnaturalización-hibridación-extensión) se...