Reaccin De Transaminacin y Su Reconocimiento Por Medio De Cromatografa En Papel

Departamento de Bioquímica General.
Práctica No.9. “Reacción de transaminación y su reconocimiento por medio de cromatografía en papel”.
Integrantes:
Calderón Jiménez Alejandra
Palacios García Luis Andrés
3FM2 Sección 1
25 de abril del 2011.

INTRODUCCIÓN.
Las reacciones de transaminación catalizadas por transaminasas son centrales en el metabolismo aminoacídico porque a través deellas se sintetizan y se degradan los aminoácidos. Es decir, estas enzimas que catalizan la transferencia del grupo amino del carbono α de un aminoácido al carbono α de un cetoácido, permiten sintetizar aminoácidos a partir de cetoácidos y viceversa (figura 1).
• Las transaminasas poseen un grupo prostético unido a su sitio activo; el fosfato de piridoxal (PAL), que proviene de la vitamina B6. Enuna reacción de transaminación (figura 1A) el aminoácido (AA1) cede su grupo amino al PAL que se transforma en fosfato de piridoxamina (PAM). Como consecuencia, se produce un cetoácido (CA1) que se libera y el PAM cede el grupo amino al cetoácido sustrato (CA2), que se transforma así en el correspondiente aminoácido (AA2) y se regenera el PAL (figura 1A).
• La reversibilidad de las reacciones detransaminación permite ajustes de acuerdo a la demanda de aminoácidos, aunque algunas transaminasas tienden a actuar principalmente en una dirección.














OBJETIVOS.
* Mostrar el conjunto de reacciones que integran cada una de las vías metabólicas.
RESULTADOS.










CALCULO DE LOS VALORES DE Rf E INFORMADOS EN FORMA DE TABLA.| Rf. |
Alanina. | 0.850 |
Ácido Glutámico 5μl | 0.729 |
Ácido Glutámico 10μl | 0.723 |
Ácido Glutámico 15μl | 0.738 |
Ácido Glutámico 20μl | 0.747 |
Ácido Glutámico 25μl | 0.750 |
Problema | 0.682 |
Testigo | 0.711 |

Ver hojas anexas.


DISCUSION.
La transaminación es una reacción catalizada por las transaminasas, en el laboratorio llevamos a cabo esta reacciónutilizando como aminoácido donador a la alanina y como cetoácido aceptor al ácido α-cetoglutárico; las condiciones a las que se llevó a cabo, fue un pH de 7.4, 37°C, y el cofactor utilizado es el fosfato de piridoxal, obteniendo como productos piruvato y ácido glutámico.
Preparamos dos tubos, un testigo y un problema; en el primero no se agrega el Ácido α-cetoglutárico y en el problema sí, con elfin de observar si en éste último se lleva a cabo la reacción.
Para preparar el cromatograma, aplicamos primero en 5 puntos diferentes concentraciones de una solución de Ácido Glutámico para graficar la curva tipo, estas 5 manchas corrieron a la misma distancia, la única diferencia fue la intensidad del color, esto debido a que se aplicaron diferentes concentraciones de la solución.
En el problemaobtenemos dos manchas, una que queda casi al nivel de las manches de la curva tipo, es decir, corresponde a el ácido glutámico, lo cual nos indica que la reacción se llevó a cabo. La segunda mancha, que corre más, corresponde a la de la alanina, esto es debido a que es una reacción reversible que siempre va a buscar el equilibrio entre reactivos y productos. Al haber gran cantidad de ÁcidoGlutámico que no reacciona todo, la reacción se “regresa” para formar más alanina y Ácido α-cetoglutárico.

En el caso del testigo también obtenemos dos manchas (alanina y acido Glutámico). Obtuvimos la mancha de acido glutámico no por acción del reactivo aceptor (Ácido α-cetoglutárico) , sino debido a que la preparación cruda de transaminasa (es decir la enzima) proviene de un hígado y por lotanto al disgregar el material que hay dentro de las células, se encuentran pequeñas cantidades de Ácido Glutámico, que es la primera mancha que se observa al nivel de las manchas de la curva tipo, de la misma manera la mancha con mayor corrimiento, corresponde a la alanina.
La aplicación con agua, fue hecha para al momento de medir la actividad espectrofotométrica de cada tubo, este sea usado...