Recuento Bacterias Viables En Leche

RESUMEN
En esta práctica vamos a hacer un recuento de bacteria viables de una serie de muestras de leche. Para ello vamos a sembrar un medio de cultivo , en este caso PCA (Place Count Agar) con una serie de diluciones de lucha cruda .Una vez hechas las diluciones y sembradas en las placas de Petri ,las dejaremos un tiempo determinado y contaremos las ufc (unidades formadoras de colonias) de cadaplaca ,siendo solamente válidas las que estén en el rango de 15 a 150 colonias.
El material que vamos a utilizar es el básico del laboratorio microbiológico ,así como el trabajo realizado en condiciones estériles ,para lo cual emplearemos autoclave ,cabina de flujo laminar, quemador Bundsen , etc…
Los resultados avalan más o menos la característica de que en cada dilución desarrollada ,que eraen grado 10, descendía el número de colonias en el mismo grado.

INTRODUCCION
Sabemos que la leche es un producto biológico con una serie de características , siendo la más importante la nutritiva al contener carbohidratos , proteínas , grasas , etc…
La leche cuando es ordeñada del animal incorpora otros componentes, entre los que están los microorganismos.En condiciones higiénicas normalesincorpora hasta 105 ufc/ml , frecuentemente enterobacterias.Así la leche se comercializa la mayor parte después de un proceso de pasteurización UHT , para que contenga un número máximo de 5 ufc/ml de enterobacterias.
En la práctica vamos a comparar el recuento de bacterias viables de la leche UHT con las de la leche cruda.
No obstante la leche cruda al tener un gran número de bacterias ,habrá quediluirla, en una seire de diluciones , 100,10-1,10-2,10-3,para hallar la más adecuada para el recuento de colonias.
Una vez que tengamos el recuento de las colonias en cada placa , calcularemos el número de ufc/ml de cada una de ellas mediante la fórmula :
∑colonias / (Vol muestra sembrada placa x dilución muestra sembrada)
Posteriormente realizaremos el cálculo de la media y ladesviación estándar de todas las diluciones y comprobaremos cual es la mejor de las series de diluciones para determinar las ufc/ml de la leche cruda.

OBJETIVOS
El objetivo principal de la práctica es el de familiarizarse con las condiciones de trabajo de un laboratorio microbiológico.Para ello nos valemos del recuento de bacterias viables en la leche cruda y sus diluciones.
Así como el realizarcorrectamente un banco de diluciones a partir de una muestra dada.
Realizar los cálculos correctos para determinar el número de ufc/ml , poniendo atención al factor de dilución y al volumen de la muestra sembrada en la placa.Así sabremos cuál es la dilución más adecuada para el recuento de bacterias en la leche cruda.

METODOLOGIA
Para preparar el medio de cultivo donde se sembraron las muestrasse realizó una disolución de 1,41 gr de PCA (Plate Count Agar) en 60 ml de agua destilada.Posteriormente se midió su Ph con el Ph-metro (Crisson Micro Ph 2000) previamente calibrado y con una precisión de ± 0,02.Como nos dio una medida de 7,00 no hubo que ajustarla con las soluciones de NaOH , o de HCl.
Se esterilizón en el autoclave durante 20 min a 1210C y 1 atm.Después para trabajar encondiciones estériles se repartió el medio de cultivo dentro de una cabina de flujo laminar entre 5 placas de Petri , donde se dejo solidificar durante unos 40 min.
Para la realización de un banco de diluciones a partir de una muestra dada,se trabajó también en un ambiente esteril alrededor de un mechero Bundsen.Para ello se cogió 0,1 ml de volumen de leche correspondiente y se diluyó en 0,9ml deRinger ,utilizándose micropipetas automáticas y tubos de Eppendorf.
La siembra de las placas se realizón con una nasa de Digralsky , depositando 0,1 ml de cada una de las muestras de leche en la superficie del medio de cultivo y sembrándolo con dicha nasa .Las placas después derotuladas se metrieron dentro de la incubadora a 370 durante 48 horas en posición invertida para impedir que si se formara...