Resumen----práctica de electroforesis
Páginas: 3 (629 palabras)
Publicado: 22 de octubre de 2010
Práctica de Electroforesis: Protocolo fenol-cloroformo (Arias y Rocha, 2004) Modificado para la extracción de ADN.
CASTRILLÓN B*, MORALES P.*bea_pirringa09@hotmail.com
Facultad de Ciencias Básicas, Universidad de la Amazonia, programa de Química, Bioquímica
Práctica realizada por el curso de Biología Molecular.
Resumen
En lasiguiente práctica se realizó la extracción del ADN de hojas jóvenes de tomate, lulo y orquídea, dado que en tejidos jóvenes el rendimiento es mayor que en hojas maduras. Esto fue posible mediante latécnica Fenol-Cloroformo (Arias y Rocha, 2004) con algunas modificaciones en el procedimiento, adjunto a la técnica de electroforesis en gel de agarosa se logró ver bandas que correspondían a la separacióngenerada.
Procedimiento
* La solución tampón utilizada es una mezcla de 2.25 ml de Tris HCl, 3 ml de NaCl, 0.45 ml de EDTA, 0.15 g de PVP, 0.15 g de CTAB.
* Extracción del ADN
Setomaron aproximadamente 2 gramos de hoja joven de cada planta, de manera individual se maceraron con nitrógeno líquido en una capsula de porcelana hasta obtener un fino polvo, el cual se pasa atubos eppendorf que por el nitrógeno mantienen la muestra a -20ºC aprox. (Imagen 01.)
Imagen 01: a) Maceración de la hoja de tomate con Nitrógeno líquido. b) Muestra en tubo eppendorf.Seguidamente, a cada tubo adicionamos 1000 µL de solución tampón (previamente preparada), para ser llevadas después a un baño María improvisado durante 45 minutos, donde cada lapso de 15 minutos eran sacados yagitados los tubos para homogenizar las muestra. Transcurrido el tiempo previsto, pasamos todas las muestras a la centrífuga, dejándolas durante 15 minutos a 14000 rpm; de ahí se obtuvo unsobrenadante que desechamos, dejando la parte orgánica en el tubo para adicionarle una cantidad proporcionada de fenol (≈200 µL), volvemos a homogenizar y centrifugar por 20 minutos a 1400 rpma. A este...
CASTRILLÓN B*, MORALES P.*bea_pirringa09@hotmail.com
Facultad de Ciencias Básicas, Universidad de la Amazonia, programa de Química, Bioquímica
Práctica realizada por el curso de Biología Molecular.
Resumen
En lasiguiente práctica se realizó la extracción del ADN de hojas jóvenes de tomate, lulo y orquídea, dado que en tejidos jóvenes el rendimiento es mayor que en hojas maduras. Esto fue posible mediante latécnica Fenol-Cloroformo (Arias y Rocha, 2004) con algunas modificaciones en el procedimiento, adjunto a la técnica de electroforesis en gel de agarosa se logró ver bandas que correspondían a la separacióngenerada.
Procedimiento
* La solución tampón utilizada es una mezcla de 2.25 ml de Tris HCl, 3 ml de NaCl, 0.45 ml de EDTA, 0.15 g de PVP, 0.15 g de CTAB.
* Extracción del ADN
Setomaron aproximadamente 2 gramos de hoja joven de cada planta, de manera individual se maceraron con nitrógeno líquido en una capsula de porcelana hasta obtener un fino polvo, el cual se pasa atubos eppendorf que por el nitrógeno mantienen la muestra a -20ºC aprox. (Imagen 01.)
Imagen 01: a) Maceración de la hoja de tomate con Nitrógeno líquido. b) Muestra en tubo eppendorf.Seguidamente, a cada tubo adicionamos 1000 µL de solución tampón (previamente preparada), para ser llevadas después a un baño María improvisado durante 45 minutos, donde cada lapso de 15 minutos eran sacados yagitados los tubos para homogenizar las muestra. Transcurrido el tiempo previsto, pasamos todas las muestras a la centrífuga, dejándolas durante 15 minutos a 14000 rpm; de ahí se obtuvo unsobrenadante que desechamos, dejando la parte orgánica en el tubo para adicionarle una cantidad proporcionada de fenol (≈200 µL), volvemos a homogenizar y centrifugar por 20 minutos a 1400 rpma. A este...
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