Seminario1

SEMINARIO 1: METODOS DE ESTUDIO, ESTRUCTURA DE CARBOHIDRATOS


1.- Concepto de obtención de homogenizados celulares
“Previa centrifugación se debe pasar la muestra por un proceso a raíz del cualse obtienen homogeneizados celulares, en esta proceso se neutraliza la muestra con un buffer 7,4 y se muele la muestra (se rompen sus membranas celulares). Generalmente se utilizan detergentesantipáticos suaves”

2.- Diferencia entre centrifugación diferencial y en gradiente de densidad. Que se obtiene, (que se separa).
“En la centrifugación diferencial mi objetivo es separar organelos, lamuestra se somete a 3 centrifugaciones. En la 1°, tras la homogenización, decantan las células y núcleos que no se rompieron durante ese proceso. Tras la 2° centrifugación (según lo que me interese de laprimera) sedimentan al fondo del tubo mitocondrias, lisosomas y peroxisomas. En la 3° sedimentan los microsomas. Sirve para separar un compartimento de otro.
En la centrifugación en gradiente,existe la forma preparada y la autogenerada. La preparada llevo lo más denso hacia arriba del liquido y en la autogenerada se crea una gradiente sola, mitocondrias sedimentan hasta igualar su densidad. Seseparan mitocondrias de lisosomas y peroxisomas.”

3.- Concepto de separación mediante cromatografía.
“Este método busca separar macromoléculas según su afinidad. La en papel considera 2 fases, unamóvil (afinidad por solvente) y una estacionaria (papel). La cromatografía en columna separa por afinidad utilizando un buffer”

4.- Principio de la electroforesis. Cuando se puede utilizar estatécnica.
“La electroforesis es un método de separación que se fundamenta en tamaño y carga, se utiliza cuando quiero separar proteínas de ácidos nucleicos. Se utiliza cuando quiero saber algunapatología.”

5.- Principales isótopos utilizados en investigación bioquímica. Limitaciones de los isótopos radiactivos.
“Los principales son el C 14, el N 15 y el oxigeno 18. Se utilizan para marcar...