Separación de una Mezcla de Azul de metileno fluoresceína por cromatografía de adsorció


Instituto Politécnico Nacional
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas


1) Laboratorio de Métodos de Análisis

2) Separación de una mezcla de azul de metileno y fluoresceína usandocromatografía por adsorción






Separación de una mezcla de azul de metileno y fluoresceína usando cromatografía de adsorción
Datos experimentales e informe
Tabla 1. Valores de absorbanciaobtenidos para la separación de Fluoresceína y azul de metileno
No. De tubo
Vol. De elución (ml)
A493
A668
Observación (color)
1
3
0.012
0.009
-
2
6
0.018
0.269
+
3
9
0.025
0.467
+
4
120.01
0.121
+
5
15
0.007
0.051
+
6
18
0.013
0.032
-
7
21
0.005
0.015
-
8
24
0.011
0.018
-
9
27
0.006
0.012
-
10
30
0.007
0.01
-
11
33
0.007
0.009
-
12
36
0.0070.006
-
13
39
0
0.001
-
14
42
0.028
0.006
-
15
45
0.194
0.003
+
16
48
0.448
0.005
+
17
51
0.142
0.001
+
18
54
0.046
0.009
+
19
57
0.032
0.016
-
20
60
0.0210.01
-
21
63
0.02
0.09
-
22
66
0.025
0.016
-
23
69
0.014
0.006
-
24
72
0.031
0.023
-
25
75
0.031
0.021
-
Nota: en el tubo 13 se obtuvo un valor de -0.001, por lo que seajustaron el resto de los valores con base en éste.




Fig. 1 Perfil de Elución para la separación de fluoresceína y azul de metileno

Cálculos
Para e ajuste de los valores de A493, fue necesariosumar 0.001 a cada lectura para hacer la corrección.
Ejemplo para el tubo 1:
0.011+0.001=0.012
Interpretación
En ésta gráfica es posible apreciar que el azul de metileno, que absorbe a 493 n, esel primero en salir del sistema mientras que la fluoresceína, que absorbe a 668 nm.

Discusión
El método empleado en la separación de una mezcla de colorantes, fue cromatografía líquido-sólido, ocromatografía por adsorción; en la cual los solutos, que son el azul de metileno y la fluoresceína, se encuentran inmersos en la fase estacionaria (alúmina) y comienzan a migrar a través de ésta fase...