Separación E Identificación De Aminoácidos Por Crotamtografía Bidimensional

SEPARACIÓN E IDENTIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS DE JUGOS DE FRUTOS POR CROMATOGRAFÍA BIDIMENSIONAL EN CAPA FINA
OBJETIVO
* Separar los aminoácidos presentes en jugo de frutos por cromatografía bidimensional en capa fina.
* Identificar los aminoácidos separados por comparación de sus valores de Rf con los de soluciones tipo de aminoácidos.
* Comparará el grado de resolución de lacromatografía bidimensional, con el de la unidimensional.
Fig.1 Cromatograma I. Unidimensional Fase móvil cloroformo-metanol-amoniaco. Se observa de izquierda a derecha los aminoácidos tipo: Gly, Arg, Lys, His, Glu, Met, Phe, Thr, His, Pro, Tyr.

Fig. 2 Cromatograma II. Unidimensional Fase móvilmetanol-etanol-agua-urea. Se observa de izquierda a derecha los aminoácidos tipo: Gly, Arg, Lys, His, Glu,Met, Phe, Thr, His, Pro, Tyr.

Figura 3. Cromatograma III. Bidimensional. Problema. Fases móviles cloroformo-metanol-amoniaco y metanol-etanol-agua-urea.

Figura 4. Cromatograma IV. Bidimensional. Fases móviles cloroformo-metanol-amoniaco y metanol-etanol-agua-urea. Se observa que no hubo una corrimiento adecuado y por consecuencia, no se separaron los aminoácidos.

DATOS EXPERIMENTALES
Tabla1 Cromatogramas unidimensionales tipo desarrolladas en las dos fases.
Aminoácido | 1° fase móvil | 2° fase móvil |
| Frente del soluto | Frente del disolvente | Rf | Frente del soluto | Frente del disolvente | Rf |
Arginina | 1.2 | 8.2 | 0.1463 | 0.2 | 7.7 | 0.0259 |
Lisina | 1.5 | 8.2 | 0.1829 | 0.1 | 7.7 | 0.0129 |
Prolina | 3.2 | 8.2 | 0.3902 | 1.2 | 7.7 | 0.1558 |
Ac. Glutámico |3.5 | 8.2 | 0.4268 | 3.5 | 7.7 | 0.4545 |
Glicina | 4 | 8.2 | 0.4878 | 1.2 | 7.7 | 0.1558 |
Histidina | 4.5 | 8.2 | 0.5487 | 0.1 | 7.7 | 0.0129 |
Treonina | 4.5 | 8.2 | 0.5487 | 1.4 | 7.7 | 0.1818 |
Tirosina | 4.9 | 8.2 | 0.5975 | 3.9 | 7.7 | 0.5064 |
Metionina | 5.5 | 8.2 | 0.6707 | 3.4 | 7.7 | 0.4415 |
Fenilalanina | 6.1 | 8.2 | 0.7439 | 3.5 | 7.7 | 0.4545 |

Rf = Frente odistancia del solutoFrente o distancia del disolvente
Tabla 2 Cromatograma bidimensional tipo desarrollado en las dos fases móviles.
No de mancha | 1° fase móvil | 2° fase móvil | Aminoácido correspondiente |
| Frente del soluto | Frente del disolvente | Rf | Frente del soluto | Frente del disolvente | Rf | |
1 | 1.3 | 7.3 | 0.178 | 0.1 | 7.7 | 0.0129 | Arginina  |
2 | 1.8 | 7.3 | 0.2465 | 0.1| 7.8 | 0.0128 |  Lisina |
10 | 3.7 | 7.2 | 0.5138 | 5 | 7.7 | 0.6493 |  Prolina |
4 | 3.8 | 7.2 | 0.5277 | 1.4 | 7.7 | 0.1818 |  Ac. Glutámico |
5 | 4.1 | 7.3 | 0.5616 | 2.5 | 7.7 | 0.3246 |  Glicina |
6 | 4.7 | 7.3 | 0.6438 | 2.6 | 7.7 | 0.3376 |  Histidina |
3 | 4.8 | 7.3 | 0.6575 | 0.2 | 7.7 | 0.0259 |  Treonina |
9 | 4.9 | 7.3 | 0.6712 | 4.3 | 7.7 | 0.5584 |  Tirosina |
8 | 5.7| 7.3 | 0.7808 | 4.6 | 7.7 | 0.5974 |  Metionina |
7 | 6.7 | 7.3 | 0.9178 | 4.2 | 7.7 | 0.5454 |  Fenilalanina |

Tabla 3 Cromatograma bidimensional problema desarrollado en las 2 fases.
No. De mancha | 1° fase móvil | 2° fase móvil |
| Frente del soluto | Frente del disolvente | Rf | Frente del soluto | Frente del disolvente | Rf |
A | 0.4 | 7.1 | 0.0563 | 0.1 | 7 | 0.0142 |
B |1.3 | 7.1 | 0.1830 | 0.1 | 7 | 0.0142 |
F | 2.1 | 7.1 | 0.2957 | 4.5 | 7 | 0.6428 |
C | 2.2 | 7.1 | 0.3098 | 0.2 | 7 | 0.0285 |
D | 2.2 | 7.1 | 0.3098 | 0.5 | 7 | 0.0714 |
E | 2.8 | 7.1 | 0.3943 | 2.3 | 7 | 0.3285 |
G | 2.9 | 7.1 | 0.4084 | 4.5 | 7 | 0.6428 |
H | 4.1 | 7.1 | 0.5774 | 1.7 | 7 | 0.2428 |
I | 4.1 | 7.1 | 0.5774 | 0.7 | 7 | 0.1 |

Tabla 4 Cromatograma bidimensionalproblema (IV) desarrollado en las dos fases móviles.
No. Mancha | Rf creciente en la1° fase móvil | Rf en la 2° fase móvil | Aminoácido correspondiente |
B | 0.1830 | 0.0142 | Arginina |
F | 0.2957 | 0.6428 | Lisina |
H | 0.5774 | 0.2428 | Glicina |

PREGUNTA EXTRA
1.- Investigar en la literatura los aminoácidos que contiene el jugo empleado como problema.
Isoleucina (20 mg), Leucina (30...