Separación e identificación de aminoácidos

INTRODUCCIÓN


En esta cromatografía las especies de analíto se adsorben en la superficie de un empaque polar. La fase estacionaria es la superficie de un sólido polar finamente dividido. Con este tipo de empaque, el analíto compite con la fase móvil por los sitios de la superficie del mismo, y la retención se debe a las fuerzas de adsorción.
La fase móvil suele ser un disolvente orgánico ouna mezcla de ellos; la fase estacionaria está hecha de partículas finamente divididas de sílice o de alúmina.
La alúmina y la sílice son las únicas fases estacionarias que tienen su uso en esta cromatografía. La sílice se utiliza en mayor medida porque tiene más capacidad de muestra y presenta más variedad en las separaciones.
Lo único que altera el coeficiente de partición de los analítos es lacomposición de las fases móviles. Una de las aplicaciones de este método es la separación de compuestos orgánicos insolubles y relativamente no polares.


APLICACIONES


|Campo |Mezclas Típicas |
||
|productos farmacéuticos |antibióticas, sedantes, esteroides, analgésicos |
|productos bioquímicos |aminoácidos, proteínas, carbohidratos, lípidos |
|productos alimenticios|edulcorantes artificiales, antioxidantes, aflatoxinas, aditivos |
|reactivos químicos industriales |aromáticos condensados, tensoactivos, propelentes, colorantes |
|contaminantes |pesticidas, herbicidas, fenoles, PCBs|
|química forense |fármacos, venenos, alcohol en sangre, narcóticos |
|medicina clínica |ácidos biliares, metabolitos de fármacos, extractos de orina, estrógenos |



FUNDAMENTO


Se refiere a la utilización de una única fase móvil que sedesplaza una única vez en una sola dirección, no llegando a mojar completamente la placa. Dentro del desarrollo vertical, el desarrollo ascendente es el más utilizado. Consiste en sumergir la placa en la fase móvil, la cual está situada en el fondo de la cámara de desarrollo, sin llegar a cubrir la zona donde se ha aplicado las muestras.
La placa queda en posición vertical apoyada, generalmente,en la pared de la cámara, la cual se cierra herméticamente. La fase móvil asciende por capilaridad.
Los desarrollos múltiples son análogos a los simples (ascendentes, descendentes y horizontales), pero la fase móvil se desarrolla de forma distinta.
En el desarrollo bidimensional la muestra se aplica próxima a una esquina de la placa y se realiza un primer desarrollo con una fase móvil, acontinuación se seca y se hace un segundo desarrollo con otra fase móvil en dirección perpendicular al primero.

1. Representación esquemática de los cromatogramas





2. Cálculos de los valores de Rf



Rf = Frente o distancia del soluto

Frente o distancia del disolvente





Tabla 1. Cromatogramas unidimensionales tipo desarrollados en las 2 fases móviles.


|| |1° fase móvil | | |2° fase móvil | |
|Aminoácido |Frente del |Frente del |Rf |Frente del |Frente del |Rf |
| |disolvente |soluto | |disolvente |soluto | |
|...