Separación E Identificación De Carbohidratos Por Capa Fina

UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PRÁCTICA # 12
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DOCENTE:Dra. Nilda Cedeño INTEGRANTES:Jennifer CoelloRuth BarzolaMayra RosadoAna LópezMaría Cevallos2009 - 2010 |
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1. MARCO TEÓRICO

Cromatografía en capa fina: Fundamento
Durante el proceso de la cromatografía en capa fina se deben separar los componentes de unamuestra entre dos fases, una móvil, que suele ser líquida y otra estacionaria, que puede ser líquida o sólida, y que está dispuesta como una capa de material poroso de un espesor determinado (absorbente), colocada sobre un soporte plano inerte, de vidrio o de aluminio. El eluyente ascenderá, por capilaridad, por la placa y arrastrará los componentes a lo largo de ésta produciendo “manchas” de loscomponentes. Estas manchas al no ser visibles se las trata con sustancias específicas que hacen visibles los compuestos químicos. Este proceso se llama revelado.

¿Cuáles son las aplicaciones de esta cromatografía?
La cromatografía de capa fina es un procedimiento que se utiliza para separar moléculas relativamente pequeñas. En la biología celular se utiliza frecuentemente para separar azúcaressimples, lípidos, aminoácidos, nucleótidos, metabolitos, y ocasionalmente para separar cadenas cortas de polipéptidos y ácidos nucleicos. La aplicación de la cromatografía está ampliamente extendida en el análisis de alimentos, medicinas, sangre, productos petrolíferos y de fisión radiactiva.

Diferencias entre la cromatografía en papel y la cromatografía en capa fina
En la cromatografía depapel la fase móvil es un líquido y el papel absorbente actúa como soporte de la fase estacionaria la cual vendría a ser líquida por las moléculas de agua contenidas en la celulosa del papel. En cambio en la cromatografía de capa fina en la que un sólido actúa como fase estacionaria se extiende en una capa delgada sobre una placa, generalmente de vidrio; y la fase móvil es líquida.
La ventaja dela cromatografía de capa fina en relación con la de papel; es el menor tiempo de separación y la mayor sensibilidad, que permite reconocer cantidades incluso muy pequeñas de sustancia químicas.

Adsorbentes utilizados en esta cromatografía (capa fina)
Al realizar la elección del adsorbente se debe tener en cuenta el tamaño de las partículas del adsorbente, cuanto más finamente dividido estémayor será su adhesión al soporte, aunque también se le puede añadir un adherente (yeso,...), también influye la polaridad, diámetro, homogeneidad y pureza. Algunos de los adsorbentes más utilizados son:
* Celulosa
* Almidón
* Azucares
* Gel de sílice (silicagel)
* Óxido de aluminio (alúmina)
* Carbón activo (carbón en polvo)
* Kieselguhr
Los tres primeros se utilizanpara extraer componentes polifuncionales de plantas y animales.
Silicagel
El gel de sílice o ácido silícico es uno de los más utilizados, es débilmente ácido, su pH oscila entre 4-5. Con lo cual no se deberá utilizar con sustancias que se corrompan con los ácidos. Los geles de sílice normales suelen contener impurezas de hierro y/o aluminio, este factor también se debe tener en cuentas respecto aluso de componentes. El tamaño del grano suele ser de 10 a 40 micras (µ) y el tamaño de poro varía de 20 a 150Å. Generalmente lleva incorporado un agente aglomerante, yeso (sulfato de cálcico semihidratado), para proporcionar firmeza al adsorbente. También han sido incorporados dos indicadores del ultravioleta, juntos o por separados (amarillo y/o verde), en diversos tipos de gel de sílice.
Setrata de un adsorbente polar, pero puede ser tratado con hidrocarburos para neutralizar los grupos -OH, de forma que se haga apto para separar componentes lipófilos (esteroides, ácidos grasos, ceras, vitaminas liposolubles, etc). A este proceso se le denomina cromatografía de fase reversa (silanizado).
Alúmina
La alúmina u óxido de aluminio es un adsorbente ligeramente básico debido a que en el...