siembra en cultivos (microbiología)











OBJETIVOS
Conocer el procedimiento de siembra de una muestra biológica en un medio de cultivo.
Reconocer las características de las colonias de los microorganismos aislados en los medios de cultivo.














FUNDAMENTOS
La siembra es el procedimiento por el cual se pone en contacto el microorganismo con un medio de cultivo, para que en condicionesoptimas de temperatura y tiempo de incubación pueda desarrollarse y multiplicarse in vitro. Se siembra con dos finalidades: a) para hacer un aislamiento y b) para hacer un transplante.
El aislamiento, permite la separación de los microorganismos al estado de pureza a partir de una muestra problema. Se requiere de un medio solido con gran superficie para que los microorganismos al ser diseminadossobre el medio, generen su progenie (cepa) por formación de colonias separadas. Si se aíslan especies distintas, cada colonia tendrá caracteres especiales. La morfología bacteriana será también distintiva.
El transporte, significa la separación primaria de la cepa a un medio de cultivo apropiado en tubo, que puede ser líquido o solido. Se conserva la cepa pura y por subsiguientes transplantes enmedios especiales, se logra conocer las propiedades culturales y bioquímicas y como resultado, la identificación especifica.
El aislamiento de bacterias aeróbicas en placas de Agar se realiza por: estrías, diseminación (en superficie) y por difusión (conteo en placa).
Los métodos de siembra o transplantes de bacterias aeróbicas en tubos se realiza a: medios líquidos en tubos, medios semisólidos ymedios inclinados especiales.
También se realizan aislamientos de microorganismos anaeróbicos (hallándose en el tracto intestinal, vías respiratorias y aparato genitourinario), realizándose en condiciones de anaerobiosis.
Siempre debe trabajarse cerca del mechero de bunsen o de alcohol para flamear la boca del tubo o la placa petri con el medio, antes y después de sembrar para evitarcontaminaciones.
Para sembrar en placa petri es importante que la superficie del medio este completamente seca, para conseguir esto las placas deben quedar en reposo durante 2 horas.











MATERIALES:
Muestras para cultivar (heces, secreción faríngea).
Tubos o placas petri con medios de cultivo (Agar Mac Conkey y Agar Manitol Salado)
Asas de siembra
Aguja de platino
Mechero debunsen o de alcohol
Plumón indeleble
Incubadora microbiológica










PROCEDIMIENTO:

METODO POR ESTRIA EN MEDIO SOLIDO EN TUBO
1. El asa de siembra en punta debe ser esterilizada en la llama (flameada al rojo), manteniéndola verticalmente en el mechero y enfriarla
2. Tomar una pequeña porción o alícuota de la muestra con el asa de siembra
3. Deslizar el asa de siembra suavementeen zigzag en el tubo con el medio solido, empezando desde el fondo del tubo
4. Esterilizar el asa de siembra a la llama y enfriarla
5. Rotular el tubo con el plumón indeleble
6. Incubas el tubo con la muestra en la incubadora microbiológica a 37°C por 24 horas.

METODO POR ESTRIA EN MEDIO SOLIDO EN PLACA PETRI
1. El asa de siembra en anillo debe ser esterilizada en la llama (flameada alrojo), manteniéndola verticalmente en el mechero y enfriarla.
2. Tomar con el asa de siembra en anillo una cantidad suficiente de muestra (o con el hisopo de madera)
3. Con la mano izquierda se toma la placa petri de agar, se manipula con los dedos para levantar parcialmente la tapa.
4. Con la mano derecha se toma el asa sosteniéndola suavemente entre los dedos con cuidado de no hundirla en elmedio. Se distribuye la muestra (inoculo) por estrías en zigzag, con escasa separación unas a otras (1 a 3 mm) en el medio solido en placa petri, dividido en cuatro cuadrantes, inoculando la muestra en cantidades menores en cada cuadrante.
5. El numero de estrías depende de la cantidad de inoculo y los planos de siembra ensayados (1,2 o 4 planos o cuadrantes). Se debe evitar romper el medio
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