técnicas de microscopia





Universidad de Guadalajara
CUCBA

Técnicas básicas aplicadas a la biología celular
Nombre de la alumna:
Gómez Casillas Ana Gabriela
Nombre del profesora: Silvia josefina López Pérez
Materia: Biología Celular






03/febrero/2015
TÉCNICAS DE MICROSCOPIA
Es el principal instrumento, aunque no elúnico, para el estudio de la célula y los tejidos es el microscopio. Una de las finalidades de la microscopía es permitir observar los especímenes de la mejor manera posible, logrando un buen balance entre el contraste y la resolución. Esto es de extrema utilidad en muestras incoloras, tales como las células vivas, que en su estado natural son transparentes y con poco contraste, en las cuales losdetalles permanecen invisibles a pesar de la resolución. Esto se debe a que las células incoloras absorben muy poca luz y por lo tanto en un microscopio de campo claro no se ven correctamente. Hay células (eritrocitos por ejemplo) que poseen pigmentos propios que le confieren color y contraste suficientes, pero esto es la excepción.
Microscopio óptico de campo claro:
Básicamente el microscopio ópticocompuesto es un tubo provisto de dos lentes (una en cada extremo) que amplían sucesivamente la imagen del objeto (preparación histológica), el cual esta intensamente iluminado. De las dos lenguas, una se encuentra próxima al objeto y se denomina lente objetivo; la otra lente se sitúa junto al ojo del observador, en cuya retina se forma la segunda imagen aumentada, y recibe el nombre de lenteocular. Si se sustituye el ojo del observador por una cámara fotográfica se pueden obtener fotografías de la preparación histológica a los mismos aumentos a los que se observa o a mayores aumentos si se amplía el negativo. Este esquema simple inicial se perfecciona el aumento, y otros dispositivos con el condensador, que concentra la luz emitida por la fuente luminosa sobre el objeto, o diversosdispositivos para aumentar el contraste (fig. 1.1)









Lo importante del microscopio no son los aumentos en sí mismos, pues una fotografía puede ampliarse todo lo que se desee sin que por ello se observen objetos que no aparecían en la imagen inicial, sino el poder de resolución. Este se define como la capacidad de distinguir como imágenes distintas dos puntos cercanos. El poder deresolución se mide utilizando como unidad la inversa del límite de resolución (poder de resolución = 1/límite de resolución). El límite de resolución se define como la distancia mínima entre dos puntos para que puedan distinguirse como tales. Se calcula por la fórmula de Abbe:
Límite de resolución= 0.61 x longitud de onda/ apertura numérica
La longitud de onda dependerá de la luz empleada; si se usaluz natural blanca, la longitud de onda es de 550 nm (nm es la abreviatura de nanómetros) la apertura numérica es igual a: n x seno α, siendo n el índice de refracción (cambio en la velocidad de la luz difractada) del medio situado entre el objeto y la lente y α el Angulo de semiapertura de la lente. Si el medio es aire n= 1 si se utiliza aceite de inmersión n=1.51. El valor del seno α essiempre menor que 1 (0.93 como máximo en los microscopios actuales) en estas condiciones:
Límite de resolución= 0.61 x 550/ (1.51 x 0.93) = 335.5/ 1.4= 240nm.
Si se tiene en cuenta el límite de resolución el ojo humano sin ayuda del lente es 0.23mm=230µm (micrómetros) = 230 000nm, el microscopio óptico ha aumentado casi 1000 veces el poder de resolución del ojo el límite de resolución del microscopiode luz es muy difícil de mejorar. Para conseguir un límite de resolución más pequeño según se desprende de la formula indicada antes habría que elevar el denominador (la apertura numérica) o disminuir el numerador (longitud de onda). Aumentar el denominador no es posible en lo que respecta al seno αpor que le seno de un Angulo nunca puede ser mayor que 1. Puede aumentarse ligeramente el...