Tarea

Técnicas en microbiología.
Tema 1. Generalidades.
Medios de cultivo:
Clases de medios:
• Medios generales o comunes
• Medios enriquecidos
• Medios de enriquecimiento
• Medios selectivos
• Medios diferenciales
• Medios mantenimiento y conservación
Métodos de esterilización.
• Calor húmedo
• Filtración
• Calor seco
• Agentes químicos
• Radiaciones
Tema 2.
Aislamiento y cultivo demuestras.
• Tipos de cultivo:
• Los medios mas usados son:
• Tipos de siembra:
• Los hongos se cultivan en cámaras húmedas.
Métodos de cuantificación.
• Cuantificación por cámara
• Test de opacidad
• UFC
• Membranas de filtración
• Epifluorescencia directa
• Coulters
• Técnica del numero mas probable (NMP
Tema 3.Técnicas de microscopia y preparación de muestras.
Las tinciones se usanpara tres cosas fundamentalmente:
Tipos de colorantes:
• Ácidos:
• Básicos:
Características de un cultivo para una buena tinción:
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Preparación de un frotis:
Tipos de tinciones:
Tinciones simples y diferenciales:
• Tinciones simples:
♦ tinción negativa
♦ tinción básica
• Tinciones diferenciales:
♦ tinción Gram
♦ tinción ácido−resistente
♦ tinción de estructuras:
♦ tinción parahongos inferiores.
Tema 4. Métodos de caracterización, diferenciación e identificación de microorganismos.
Técnicas de identificación y caracterización para levaduras.
• Microscópicamente
• Microscópicamente:
• Pruebas fisiológicas para levaduras:
♦ Capacidad de asimilar diferentes fuentes de carbono
♦ Fermentación de fuentes carbonadas
♦ Asimilación de glucosa al 50% o 60
♦ Resistencia a37ºC.
♦ Capacidad de crecimiento en presencia de cicloheximida
♦ Hidrólisis de urea
♦ Asimilación de fuentes nitrogenadas
♦ Tolerancia al ácido acético
♦ Asimilación de vitaminas
• Pruebas de estructura:
♦ Composición de la pared celular
♦ Diferencia en rutas metabólicas, en el complejo de la ubiquinona o en la coenzima Q.
• Pruebas bioquímicas:
♦ Carácter killer
♦ Fosfatasa alcalinatermorresistente
♦ Prueba de la esculina
♦ Fermentación de HdC
♦ Prueba del citrato
♦ Concentración mínima inhibitoria
Purificación e extracción de productos extracelulares (ECP):
Métodos convencionales para virus.
Tema 5. Métodos moleculares de identificación y tipado de microorganismos.
• Métodos genéticos
• Detección de enzimas mediante sustratos cromógenos
• Cromatografía gaseosa ytécnicas derivadas
• Métodos serológicos:
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• Métodos moleculares
• Técnica de la guanina−citosina
♦ HPLC
♦ Tempertura de fusión
• Electroforesis en campo pulsante
• Análisis de polisacáridos de membrana
• Perfiles de restricción de ácidos nucleicos
• Hibridación de ADN
Tema 6. Técnicas de manipulación genética de microorganismos.
Técnica de conjugación.
Técnica de fusión deprotoplastos.
Transformación.
Micromanipulación.
Tema 7. Problemas.
Técnicas en microbiología.
Tema 1. Generalidades.
Medios de cultivo:
Componentes más comunes:
• Compuestos aminonitrogenados: peptonas, extractos, infusiones, etc...Los microorganismos no suelen
tener enzimas extracelulares con las que hidrolizar las proteínas para obtener nitrógeno, por ello es
necesario suministrar extractos yahidrolizados.
Peptonas: hidrolizado proteico fuente de nitrógeno. Se obtiene de diferentes formas, por hidrólisis enzimatica
o por hidrólisis ácida, las dos formas dan resultados distintos. Las peptonas no son útiles para pruebas de
identificación o caracterización por que poseen restos de azucares que podrían dar falsos positivos.
• Extractos de carne, malta, levadura..: el de levadura es elmas usado porque tiene vitaminas factores
de crecimiento vitaminas y es fuente de N.
• Factores de crecimiento: sangre, suero, vitaminas, NADH, metales traza, aminoácidos,.... Hay que
tener cuidado por si fuesen termolábiles, ya q no se podrían esterilizar en autoclave. También se usan
como agentes protectores contra ciertos microorganismos.
• Fuentes de energía: generalmente glucosa.
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