Tarea

INSTITUTO DE ESTUDIOS SUPERIORES
DE CHIAPAS.

LABORATORIO: BACTERIOLOGÍA 1

DOCENTE:
Q.F.B. LILIAN DE JESUS TIRADO MORALES


PRACTICA No. 6 PREPARACIÓN, FIJACIÓN Y COLORACIÓN SIMPLE Y DIFERENCIAL DE FROTIS.

ALUMNO:
ABEL ARCINIEGA REYES
3º SEMESTRE GRUPO “A”
CARRERA. QUIMICO-FARMACOBIOLOGO.

Tapachula chis,
A 06 de noviembre del 2012.

PRACTICA No. 6PREPARACIÓN, FIJACIÓN YCOLORACIÓN SIMPLE Y DIFERENCIAL DE FROTIS.

OBJETIVO:

* Que el alumno aprenda las técnicas de preparación, fijación y coloración de frotis más utilizadas en el estudio microscópico de cultivos bacterianos.
* Conocer los métodos de tinciones, aprender a realizar la técnica de tinción simple usada en bacteriología.
* Conocer y distinguir que es tinción diferencial así como aplicar latécnica de Tinción de Gram.

INTRODUCCIÓN

Debido al pequeño tamaño de la mayoría de los microorganismos, se requiere de un microscopio óptico, ya sea de campo claro o de campo obscuro para hacer la descripción morfológica de estos, El microscopio de uso más común es el de campo claro, en el que la observación de células vivas en limitada debido a que las células son incoloras y permiten elpaso de una gran cantidad de luz.
La observación de frotis teñidos es más recomendable. El frotis se prepara haciendo una extensión de los microorganismos sobre una superficie transparente, en el cual se fijan y se tiñen los microorganismos. De acuerdo al número de soluciones colorantes y a los objetivos de estudio se pueden realizar diferentes tipos de tinciones como son: simple, diferencialnegativa y selectiva.
Los frotis de cultivos líquidos se deberán fijar con alcohol para evitar residuos del medio. Que al quemarse darán interferencias en las observaciones y las colonias de medios sólidos se fijan generalmente con calor. Después de la fijación, los frotis son teñidos con diferentes colorantes sintéticos derivados de anilina 
Los colorantes más utilizados son sales fordas por ionescolorantes cargados conocidos como cromoformos. Por ejemplo: 
Cloruro de azul de metilo ------ Azul de metilo + Cl-(cromoformo)
Si el cromoformo es un ion positivo el colorante es de tipo básico, pero si la carga es negativa será de tipo ácido. La mayoría de las bacterias son teñidos por colorantes básicos, que será de un tipo ácido, La mayoría de las bacterias son bacterias son teñidas porcolorantes básicos, que pernean la pared celular y adhieren por enlaces ionices débiles a moléculas con cargas negativas de la célula bacterianas. La tinción de las bacterias con color azul de metilo, es un ejemplo de tinción simple que facilita la observación de forma, tamaño y arreglo de las células.

MATERIAL Y REACTIVOS:
*
* asas bacteriológicas
* 5 agujas de inoculación
* 1mechero bunsen
* 10 portaobjetos
* 1 Tubo de ensayo de 13 x 100
* Lápiz diamante
* 1Gradilla
* Azul de metileno
* Nigrosinao tinta china
* Safranina
* Verde de malaquita
* Papel filtro
* Puente para tinción
* Solución Salina Isotónica (SSI)
* Set de colorantes para la tinción de gram
* Aceite de Inmersión
* Cultivo bacteriológicoPROCEDIMIENTO:

* PREPARACIÓN DE FROTIS

a. Lavar Perfectamente los portaobjetos, secarlos con papel y etiquetarlos.
b. Prender el mechero y esterilizar el asa en la flama hasta que se ponga al rojo vivo.
c. Dejar enfriar el asa para evitar que al tomar la muestra los microorganismos sean destruidos.
d. Para el caso de cultivos líquidos, colocar lamuestra en el centro delportaobjetos, extenderla suavemente en un área circular de 2 cm. De diámetro aproximadamente y esterilizar nuevamente el asa. Dejar enfriar el frotis al aire libre y repetir los procedimientos 3 y4 por 2-3 veces más.
e. Si el cultivo es de medio sólido, previamente se coloca en el centro del portaobjetos una gota de agua destilada o SSI en el que se mezcla una pequeña muestra del cultivo...