Tecnica De Tincion Simple, Diferencial Y Selectiva

TÉCNICAS DE TINCIÓN SIMPLE, DIFERENCIAL Y SELECTIVA. INTRODUCCIÓN
El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de ver con el microscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la célula y el medio que la rodea, y el medio más simple de aumentar el contraste es la utilización de colorantes. Estos pueden emplearse para distinguir entretipos diferentes de células o para revelar la presencia de determinados constituyentes celulares, tales como flagelos, esporas, cápsulas, paredes celulares, centros de actividad respiratoria, etc. El microscopio: El microscopio es el instrumento más necesario para un microbiólogo, ya que permite la observación de organismos que no pueden ser apreciados en detalle a simple vista, es decir de losmicroorganismos. Existe una gran variedad de microscopios que, según la fuente de iluminación utilizada, se agrupan en: 1. Microscopios ópticos: La fuente de iluminación es la luz.  De campo claro. Permiten la observación de preparaciones, en su color natural o contrastado mediante tinciones, resaltadas sobre un fondo más brillante.  De campo oscuro. Permiten la observación de formas celulares quedestacan brillantes sobre un fondo oscuro. Este efecto se consigue utilizando diafragmas especiales.  De contraste de fases. Gracias a la utilización de diafragmas y objetivos especiales, que consiguen aumentar las diferencias en el índice de refracción de las células y el medio que las rodea, permiten la observación de células vivas, ya que no es necesario realizar ninguna tinción de las mismas. De interferencia. Permiten observar células vivas sin teñir, obteniéndose una imagen en relieve de las mismas.  De fluorescencia. La luz ultravioleta que excita ciertas moléculas presentes en las células (bien de forma natural o añadida a la preparación) que emiten fluorescencia en el espectro visible.  Confocal. Permite obtener imágenes bi y tridimensionales de alta resolución. Es unmicroscopio computarizado que acopla un láser a un microscopio óptico obteniéndose imágenes fluorescentes. Análisis digital por ordenador. Tiene un diafragma especial llamado pinhole que elimina la señal de las regiones que se encuentran fuera de foco. 2. Microscopios electrónicos: La fuente de iluminación es un chorro de electrones y las lentes son electroimanes.  De transmisión. Permiten la observaciónde muestras teñidas con sustancias que son resistentes al paso de electrones y cortadas dando lugar a láminas finas, denominadas cortes finos. Los electrones no son visibles directamente por lo que éstos se envían a una pantalla que emite fluorescencia más o menos intensa según el número de electrones que inciden en ella. Las estructuras celulares que se tiñan más intensamente impedirán el paso deelectrones y por lo tanto no permitirán la emisión de fluorescencia, por lo que estas 4 estructuras aparecerán oscuras en un fondo más brillante. Se consiguen entre 10.000 y 100.000 aumentos.

 De barrido. Permiten la observación de células enteras, sin necesidad de cortes finos, de modo que aparecen los relieves originales y las superficies externas. Alcanzan entre 1.000 y 10.000 aumentos.Tinciones: Son técnicas que permiten observar microorganismos en función de la capacidad de los mismos para retener o no determinadas sustancias colorantes, lo que depende de la carga de la célula y del colorante. Los colorantes pueden ser de distintos tipos:  Catiónicos. Son sustancias que tienen carga positiva. Penetran en el interior de las células y las tiñen. Ejemplos: azul de metileno,cristal violeta, safranina.  Aniónicos. Con carga negativa. No penetran en el interior celular, de modo que no tiñen las células, sino el entorno. En este caso se habla de tinción negativa. Ejemplos: eosina, nigrosina.  Liposolubles. Se mezclan con los lípidos celulares y los tiñen. Ejemplo: negro sudán. Las tinciones pueden ser:  Simples. Utilizan un solo colorante. Se basan en el hecho de...