tecnicas de aislamiento bacteriano

PRÁCTICA No 3

TÉCNICAS DE AISLAMIENTO BACTERIANO

INTRODUCCIÓN
Una técnica muy común en el laboratorio de microbiología es la transferencia de
microbios de un ambiente a otro con el propósito de cultivarlos. Es necesario
tomar las debidas precauciones para evitar la contaminación de los cultivos.
Para el estudio e identificación de microorganismos éstos deben aislarse o
separarse apartir de un cultivo mixto o de poblaciones que se encuentran en la
naturaleza. Existen varias técnicas para el aislamiento de microorganismos y la
obtención de cultivos puros, dentro de las más utilizadas se encuentran:
a) Siembra por estrías en caja de Petri o tubo de ensaye.
b) Vaciado en placa donde se obtienen colonias tanto en la superficie como en
partes profundas del medio inoculado.
c)Cultivo por dilución y agitación.
d) Aislamiento de bacterias con una varilla angular de vidrio.
e) Aislamiento de microbios extraídos con un aplicador de algodón.
f) Siembra por picadura, etc.
Después de que una población de microorganismos ha estado creciendo por cierto
tiempo en el mismo tubo de ensaye o caja de Petri, debe ser transferido a un
medio de cultivo nuevo para que puedacontinuar su crecimiento y supervivencia.

OBJETIVO
1. Aprender las técnicas fundamentales empleadas para la transferencia y
aislamiento de microorganismos.

MATERIALES
-Tubos de ensaye con caldo nutritivo
-Tubos de ensaye con agar nutritivo (superficie inclinada)
- Cajas de Petri con agar EMB
-Tubos de ensaye con medio SIM (superficie horizontal)
-Cajas de Petri con agar nutritivo
-Tubosde ensaye con S-110
-Asa y aguja de inocular
-Mechero
-Algodón
-cinta testigo
-Kleen pack
-Muestra mixta
Cultivos:
-Bacillus subtilis
-Escherichia coli
-Staphylococcus aureus
-Pseudomonas aeruginosa
-Proteus vulgaris
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Técnica aséptica:
1.-Limpiar perfectamente la mesa de trabajo con alcohol.
2.- Lavarse las manos con jabón y después frotárselas con un algodón con
alcohol.3.-Colocar los tubos y demás material en una posición adecuada en la que se
puedan alcanzar sin dificultad y sin peligro de quemarse.
4.- Trabajar siempre junto al mechero, ya que este proporciona una zona de
esterilidad de aproximadamente 20 cm. de radio.
5.- Antes de realizar cualquier siembra, esterilizar el asa o aguja a fuego directo
hasta el rojo vivo, enfriar cerca del mechero, sembrar yvolver a esterilizar.
6.- Durante la siembra, deben permanecer cerradas las puertas y ventanas y no se
debe hablar.

Técnicas de sembrado.
1.- Inoculación de medios líquidos:
a) Tomar con una mano el tubo que contenga el cultivo y otro con caldo nutritivo
estéril.
b) Con la otra mano, tomar el asa y esterilizarla hasta el rojo vivo. Quitar los
tapones de los tubos con los dedos libres de lamano que sujeta el asa, tener
cuidado de no acercarlo demasiado al mechero.
c) Flamear los bordes de ambos tubos, introducir el asa al cultivo y tomar una
pequeña muestra sin rasgar el medio.
d) Introducir el inóculo dentro del tubo con el caldo y agitar el asa.
e) Retirar el asa, flamear nuevamente los bordes de los tubos y colocar los
tapones.
f) Esterilizar el asa.
g) Etiquetar el tuboinoculado (medio de cultivo empleado, microorganismo
inoculado, número de equipo, sección y fecha)
h) Guardar a temperatura ambiente.
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Método correcto de la inoculación con el asa en medio líquido.
2.-Inoculación en medio inclinado
a) Tomar un tubo que contenga el cultivo y otro con el medio inclinado.
b) Sujetar los tubos, remover los tapones y realizar los pasos asépticos como seexplicó anteriormente.
c) Esterilizar el asa y tomar un inóculo del medio de cultivo.
d) Introducir el asa hasta el fondo del tubo y deslizarla a manera de estrías sobre
la superficie del medio hasta el extremo externo, sin repetir la operación.
e) Flamear los bordes de los tubos y taparlos.
f) Esterilizar el asa.
g) Etiquetar el tubo inoculado.
h) Incubar.
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Siembra en medio sólido...