tecnicas de coloracion

 
Metodo
Fundamento
Sensivilidad
Ventajas
Desventajas
Observaciones
Colorimetria
Biuret
Formacion de un complejpo coloreado entre el acido cuprico y grupos metileno de los enlacespeptidicos en medio basico. La intensidad de coloracion es direcetamente proporcional a la cantidad de proteinas (enlaces peptidicos)
1000 a 10000 ug
bastante especifico, muestra pocoas inteferencias, esbarato
Poca sensivilidad
 

Bradford
El colorante Comassie blue G250 se une a las proteinas en solucion acida
1 a 15 ug
Muy sensible, simple, rapido y barato
Los detergentes y las solucionesbasicas son interferentes.
 

Bicinconinico BCA
El BCA, sal sodica, forma un complejo purpura con iones Cuprosos en medio alcalino
0,5 a 10 ug
Es el metodo mas sensible y el que muestra menosinterferencias
No tiene
Es capaz de monitorizar el ion cuproso producido en una reaccion entre proteínas y acido cuprico en medio alcalino (metodo Biuret)

Lowry
Dependen de la concentración detirosina y triptófano de la muestra. Consiste en dos reacciones: Biuret y Folin (característica de los grupos –OH reductores de los aminoácidos tirosina y triptófano que, junto con los complejos Cu+2,reducenel reactivo de Folin generando un color azul.
Se utiliza una curva: 25-100 a 500 nm / 230 a 660 nm / 1-2 a 750nm
tiene bastante sensibilidad
Esta sujeto a muchas interferencias como detergentes noionicos, sulfato amonico, etc.
 
 
Absorcion
Ley de Lambert-Beer
A280 (uv cercano) --> 100 a 3000 ug
No se pierden las muestras
Interfieren muchos compuestos que absorben el UV cercano.
 Turbidimetria y nefelometria
Acido sulfosalicilico
Principio de error proteico de los indicadores acido-base o en la capacidad de las proteínas de presipitar en presencia de ácido-calor.
 
Norequeire calor para la reaccion. Mas sensible y especifico para todas las proteínas (albúmina, globulinas, glucoproteínas y Bence Jones)
 
 

Acido tricloroacetico
Las proteínas se vuelven mas...