tema 5
Páginas: 12 (2762 palabras)
Publicado: 15 de marzo de 2016
5. Microscopía de fluorescencia y
epifluorescencia
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
Espectro de luz visible:
La longitud de onda determina el color
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
¿Qué es?
Es un proceso de interacción entre la radiación y la
materia en el cual un material absorbe radiación de
una fuente específica y muy rápidamente emite luz
cuya energía esmenor (de mayor longitud de onda)
que la de la radiación que ha absorbido.
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
Espectro de luz visible:
Excitación
Emisión
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
¿Cómo se produce?
Los
electrones
son
excitados
a
estados
vibracionales y rotacionales más altos y cuando
vuelven a su estado fundamental emiten la energía
de excitación en formade radiación.
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
¿Cómo se produce?
E
Diagrama de Jablonski
S'1
S1
S0
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
¿Cómo se produce?
E
Diagrama de Jablonski
S'1
S1
S0
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
¿Cómo se produce?
Diagrama de Jablonski
1) La absorción de la luz de excitación eleva la
molécula del fluorocromo a un estadode excitación
con un mayor contenido de energía, S’1.
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
¿Cómo se produce?
E
Diagrama de Jablonski
S'1
S1
S0
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
¿Cómo se produce?
Diagrama de Jablonski
2) En este estado de excitación se mantienen un
tiempo determinado, de 10-9 a 10-8 segundos, en el
cual la molécula sufre cambios conformacionales einteracciones con las moléculas de su entorno.
Como consecuencia, parte de la energía del estado
S’1 se disipa, creándose un estado S1 de menor
energía.
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
¿Cómo se produce?
E
Diagrama de Jablonski
S'1
S1
S0
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
¿Cómo se produce?
Diagrama de Jablonski
3) Pasado este tiempo de excitación la moléculaemite luz de menor energía volviendo a su estado
fundamental, S0.
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
¿Cómo se produce?
E
Diagrama de Jablonski
S'1
S1
S0
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
●
Debido a la disipación interna de energía la luz
emitida tiene siempre una longitud de onda mayor
(menor energía) que la luz de excitación.
●
La cantidad de luz emitida es muypequeña en
comparación con la utilizada para la excitación.
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
●
Lo
que
diferencia
fosforescencia
a
(ambos
la
fluorescencia
son
de
procesos
la
de
luminiscencia) es el tiempo de vida más largo de
éste
último
proceso
que
puede
ir
desde
milisegundos a minutos y ocurre después de que el
proceso de absorción haya terminado.
5. Microscopíade fluorescencia
Fluorescencia
●
Los materiales que fluorescen lo hacen porque
contienen
estructuras
con
configuraciones
moleculares particulares conocidas como fluoróforos
o fluorocromos.
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
●
Un fluorocromo es una molécula capaz de absorber
fotones y emitir fotones de menor energía (mayor
longitud de onda).
●
Un
fluoróforo
es
la
partedel
fluorocromo
responsable de la emisión de la fluorescencia.
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
Tipos de fluorescencia:
●
La fluorescencia primaria es la que se da porque
existe una configuración inherente a la estructura
molecular.
Algunas de las fluorescencias más intensas que se
observan se asocian con moléculas aromáticas, la
fluorescencia de materiales inorgánicos seobserva
en muchos minerales y piedras preciosas, y quelatos
específicos:
Clorofila, aceite de inmersión, GFP
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
Tipos de fluorescencia:
●
La fluorescencia secundaria ocurre cuando una
molécula específica o un grupo capaz de fluorescer,
un fluorocromo, se introduce en la estructura de la
muestra.
Éste es el procedimiento para la mayoría de las
aplicaciones...
epifluorescencia
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
Espectro de luz visible:
La longitud de onda determina el color
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
¿Qué es?
Es un proceso de interacción entre la radiación y la
materia en el cual un material absorbe radiación de
una fuente específica y muy rápidamente emite luz
cuya energía esmenor (de mayor longitud de onda)
que la de la radiación que ha absorbido.
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
Espectro de luz visible:
Excitación
Emisión
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
¿Cómo se produce?
Los
electrones
son
excitados
a
estados
vibracionales y rotacionales más altos y cuando
vuelven a su estado fundamental emiten la energía
de excitación en formade radiación.
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
¿Cómo se produce?
E
Diagrama de Jablonski
S'1
S1
S0
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
¿Cómo se produce?
E
Diagrama de Jablonski
S'1
S1
S0
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
¿Cómo se produce?
Diagrama de Jablonski
1) La absorción de la luz de excitación eleva la
molécula del fluorocromo a un estadode excitación
con un mayor contenido de energía, S’1.
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
¿Cómo se produce?
E
Diagrama de Jablonski
S'1
S1
S0
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
¿Cómo se produce?
Diagrama de Jablonski
2) En este estado de excitación se mantienen un
tiempo determinado, de 10-9 a 10-8 segundos, en el
cual la molécula sufre cambios conformacionales einteracciones con las moléculas de su entorno.
Como consecuencia, parte de la energía del estado
S’1 se disipa, creándose un estado S1 de menor
energía.
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
¿Cómo se produce?
E
Diagrama de Jablonski
S'1
S1
S0
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
¿Cómo se produce?
Diagrama de Jablonski
3) Pasado este tiempo de excitación la moléculaemite luz de menor energía volviendo a su estado
fundamental, S0.
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
¿Cómo se produce?
E
Diagrama de Jablonski
S'1
S1
S0
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
●
Debido a la disipación interna de energía la luz
emitida tiene siempre una longitud de onda mayor
(menor energía) que la luz de excitación.
●
La cantidad de luz emitida es muypequeña en
comparación con la utilizada para la excitación.
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
●
Lo
que
diferencia
fosforescencia
a
(ambos
la
fluorescencia
son
de
procesos
la
de
luminiscencia) es el tiempo de vida más largo de
éste
último
proceso
que
puede
ir
desde
milisegundos a minutos y ocurre después de que el
proceso de absorción haya terminado.
5. Microscopíade fluorescencia
Fluorescencia
●
Los materiales que fluorescen lo hacen porque
contienen
estructuras
con
configuraciones
moleculares particulares conocidas como fluoróforos
o fluorocromos.
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
●
Un fluorocromo es una molécula capaz de absorber
fotones y emitir fotones de menor energía (mayor
longitud de onda).
●
Un
fluoróforo
es
la
partedel
fluorocromo
responsable de la emisión de la fluorescencia.
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
Tipos de fluorescencia:
●
La fluorescencia primaria es la que se da porque
existe una configuración inherente a la estructura
molecular.
Algunas de las fluorescencias más intensas que se
observan se asocian con moléculas aromáticas, la
fluorescencia de materiales inorgánicos seobserva
en muchos minerales y piedras preciosas, y quelatos
específicos:
Clorofila, aceite de inmersión, GFP
5. Microscopía de fluorescencia
Fluorescencia
Tipos de fluorescencia:
●
La fluorescencia secundaria ocurre cuando una
molécula específica o un grupo capaz de fluorescer,
un fluorocromo, se introduce en la estructura de la
muestra.
Éste es el procedimiento para la mayoría de las
aplicaciones...
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