Tesis

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INSTITUTO TECNOLÓGICO EL LLANO AGUASCALIENTES

TESIS PROFESIONAL “METODOLOGÍA PARA LA EXTRACCIÓN DE ADN Y PROTEÍNAS EN MAGUEY MEZCALERO (Agave salmiana)”

QUE PRESENTA GILBERTO LÓPEZ HERNÁNDEZ

COMO REQUISITO PARCIAL PARA OBTENER EL TÍTULO DE

INGENIERÍA EN AGRONOMÍA

El Llano, Ags., Agosto 2011.

COMITÉ DE TITULACIÓN

La presente tesis, titulada “METODOLOGÍA PARA LA EXTRACCIÓN DEADN Y PROTEÍNAS EN MAGUEY MEZCALERO (Agave salmiana)”. Fue revisada y aprobada, por el comité integrado por el Dr. Héctor Silos Espino como Presidente, el Dr. Alejandro Amante Orozco como Secretario, la Dra. Silvia Flores Benítez como Primer Vocal y el M. C. Francisco Nieto Muñoz como Vocal Sustituto, siendo el día ocho de Julio del año dos mil once, en el Instituto Tecnológico El Llano,Aguascalientes.

Ha sido autorizada como requisito para obtener el título Ingeniero en Agronomía

_______________________________ Dr. Héctor Silos Espino Presidente

_______________________________ Dr. Alejandro Amante Orozco Secretario

_______________________________ Dra. Silvia Flores Benítez Primer Vocal

_______________________________ M. C. Francisco Nieto Muñoz Vocal Sustituto Agradecimientos

A todo el personal del Instituto Tecnológico el Llano, Aguascalientes por abrirme las puertas al aprendizaje y darme la oportunidad de llevar a cabo mi formación profesional. Al personal del Colegio de Postgraduados Campus San Luis Potosí por todo el apoyo y facilidades para realizar mi estancia de Residencia Profesional. Al Dr. Héctor Silos Espino por cada consejo, su franca amistad yadmirables principios. Al M.C. Edgar León Esparza Ibarra por su confianza y valiosa ayuda en el desarrollo de este trabajo. Dr. Alejandro Amante Orozco por todo el apoyo brindado. Al Dr. Jorge Luis Ayala Luján y a la Dra. Marisa Hernández Barrales del Laboratorio de Patología y Diagnóstico Molecular en la UAZ, por todas las facilidades prestadas e invaluable apoyo. A la Dra. Silvia Flores Benítezpor su gran ayuda en la revisión y corrección del presente documento. A la Q. A. Lucía Delgadillo Ruiz por la paciencia y ayuda de su gran experiencia. Al Lic. Rusland Enrique Torres Orozco por su incondicional apoyo en el trabajo y amistad. A cada uno de mis compañeros y amigos de la carrera, por cada experiencia compartida.

Siempre estaré agradecido.

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Dedicatoria

A mis abuelos

Amis padres Hilaria y Porfirio, fuente de mi fortaleza e integridad por siempre

A mis hermanos René, Silvestre, Ana, Roque, Mayra, Itzel, Amelia y Jassiel por ser el principal aliento para seguir

A mi Profe. Alberto, por cada una de sus enseñanzas

A Aranzazú por este instante de anhelos, instante intemporal

A Ismael por compartir desde infancia, la realidad en todo momento…

ii RESUMEN

En este trabajo se determinó una metodología adecuada para la extracción del ácido desoxiribonucleico (ADN) y de proteínas en Agave salmiana, como apoyo a investigaciones proyectadas en la región mezcalera del Altiplano PotosinoZacatecano. Para la extracción de ADN se realizó el ensayo y compararon tres protocolos, el método mini-prep usando CTAB (Bromuro de cetiltrimetilamonio), elmétodo modificado CTAB-STE y el producto comercial PlantDNAzolReagent®. Para la extracción de proteínas se compararon dos metodologías, la primera mediante el buffer de extracción NET-2 usado por Nambara et al. (1992) y el método por precipitación salina según Gorinstein et al. (1999); Silos et al. (2003) usando buffer Tris-HCl y acetato de amonio. El método que permitió mayor cantidad (hasta 660 ng apartir de 0.5 g de tejido fresco) y calidad del ADN fue el de CTAB-STE, (aunque lleva mayor tiempo en procesar las muestras) y le siguió el producto comercial PlantDNAzolReagent® con RNasa, que reduce el tiempo de tratamiento de las muestras con resultados cercanos al optimo en Absorbancia (A260/280). Ambos métodos permiten la extracción de ADN de calidad y óptimo amplificable.

Para la...
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