Tinción de Gram

TINCIÓN DE GRAM
Es la más importante en bacteriología. Gracias a ella distinguimos dos tipos de bactrias:
- Gram +. Son aquellas que se tiñen con cristal violeta(colorante primario)
- Gram -. Son aquellas que se tiñen con safranina (colorante secundario)
Protocolo:
1. Frotis
2. Fijación
3. Cristal violeta (2 minutos)4. Lugol (un minuto). Es un mordiente que aumenta la afinidad de la célula por el colorante anterior.
5. Alcohol 96º o acetona. Decolora la preparación. 45 segundos.6. Lavar con agua
7. Safranina (un minuto)
8. Lavar con agua, secar y observar
Las gram + aparecerán violetas, y las gram – aparecerán rosas. Las diferencias entre+ y – obedecen a la estructura de su pared celular:
Las gram + tienen una pared muy gruesa que contiene muy pocos lípidos, mientras que las gram – son muy delgadas ycontienen gran cantidad de lípidos.
Con el cristal violeta, tanto las + como las – se tiñen de violeta, y con el lugol, retienen el colorante aún más. El alcohol96º, que es un deshidratante, elimina los lípidos de las células. Las gram + pierden los pocos lípidos que tienen, pero esto no afecta a la permeabilidad de su pared.Las gram -, en cambio, tienen muchos lípidos, así que provoca grandes poros, alterando la permeabilidad. Como consecuencia se elimina el cristal violeta.
Con lasafranina, las gram + no s tiñen, porque ya están ligadas al cristal violeta, pero las gram – sí.
La tinción de Gram debe realizarse en cultivos jóvenes de bacterias, yaque presentan paredes normales, mientras que en cultivos viejos, las paredes están degradadas. Una garm + vieja se comportaría como una gram -.