Tincion de Gram

Universidad de Sonora
Division de las ciencias biologicas y de la salud
Campus Cajeme





1er Reporte de practicas (Tincion de Gram)




Gabriela Miranda Laborín
Expediente: 214201047
Correo: gabmirandal@hotmail.com
Lic. En Enfermería
Maestra: Norma Patricia Silva Beltran



Cd. Obregón, Sonora a 11 de Febrero de 2015

Introduccion

Para observar las característicasmorfologicas de las bacterias, las preparaciones fijas y teñidas son las que se usan con mayor frecuencia. Las ventajas de este procedimiento son que:
a) Las células y otros materiales presentes en la preparación son más claramente visibles después de ser teñidas.
b) Las tinciones facilitan la observación de diferencias entre células.

Para teñir los microorganismos se dispone de un gran númerode compuestos orgánicos coloridos llamados colorantes. En general estos colorantes pueden presentar grupos alcalinos que les permiten unirse a compuestos ácidos presentes en la preparación o viceversa (Koneman y col., 2008)
La tinción de Gram fue desarrollada en 1884 por el bacteriólogo danés Hans Christian Gram. Es uno de los procedimientos de tinciones más utilizados porque permite dividir alas bacterias en dos grandes grupos, Gram positivas y Gram negativas, de acuerdo a la retención o no del cristal violeta (Cisternas, 2007)
Los resultados de la tinción son más consistentes cuando la técnica es utilizada en bacterias jóvenes o en desarrollo (cultivos nuevos). En muchos de los casos, el informe de la tinción Gram brinda información relevante para la aplicación de un mejortratamiento médico frente a un proceso infeccioso. Por ejemplo: las infecciones causadas por bacterias Gram positivas pueden ser tratadas con antibióticos del tipo de las penicilinas, en cambio las infecciones causadas por bacterias Gram negativas pueden requerir la aplicación de cefalosporinas o aminoglucósidos (Koneman y col,. 2008)
Materiales y métodos.

Material y equipo
Alcohol-cetona
Safranina(solución al 2.5% en alcohol).
Microscopio óptico
Aceite de inmersión
Agua destilada
Mechero de Bunsen
Procedimiento
A. Preparación del frotis
1. Lavar los portaobjetos, secarlos y etiquetarlos en la parte superior o inferior.
2. Colocar una gota de agua destilada en el centro del portaobjeto.
3. Esterilizar el asa en el mechero hasta el rojo vivo.
4. Dejar enfriar el asa yseleccionar una colonia pequeña del medio nutritivo.
5. Colocar el inoculo tomado con el asa en la gota de agua y extenderlo suavemente y dejar secar
6. al aire.
7. Una vez secos, se fijan finalmente con calor, esto se hace pasando el frotis 2 o 3 veces
8. rápidamente sobre la flama del mechero.
B. Preparación de la tinción Gram
1. Una vez fijado el frotis, se cubre la superficie del inoculo,colocado en el portaobjeto de cristal
2. violeta y se deja reposar por 1 minuto.
3. Transcurrido el tiempo, se quita el excedente de cristal violeta con agua destilada (no secar)
4. Adicionar yodo (lugol) y dejarlo reposar por 1 minuto.
5. Transcurrido el tiempo, se quita el excedente con agua destilada (no secar).
6. Posteriormente se adiciona alcohol-cetona (70:30 v/v) y se decolora por 30segundos.
7. Lavar con agua
8. Adicionar safranina por 30 segundos
9. Lavar con agua y dejar que se seque.
10. Una vez seco, llevar a su observación al microscopio óptico, favor de esperar a recibir las instrucciones que dará el maestro.















Resultados













Discusión
Para llevar a cabo la tinciónse lleva a cabo la siguientemetodología.
El cristal violeta penetra en todas las células bacterianas (tanto Gram positivas como Gram negativas) a través de la pared bacteriana.
El lugol es un compuesto formado por yodoy actúa de mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula bacteriana. El yodo entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el...