Tincion gram

2. Tema
Tinción de Gram
3. Objetivos
3.1 Objetivo General
* Conocer el procedimiento para la Tinción de Gram, reconocer la morfología e identificar las bacterias Gram positivas o negativas
3.2 Objetivos Específicos

* Desarrollar la tinción diferencial de gram que nos permitirán observar a través del microscopio la morfología distintos microorganismos
* Clasificar algunasespecies bacterianas en Gram positivas o Gram negativas de acuerdo a la tinción de Gram.
* Comprender la importancia que tienen estas tinciones para la caracterización e identificación de las bacterias.
4. Marco Teórico
La tinción diferencial requiere más de un tipo de colorante y se utiliza para distinguir entre varios tipos de células bacterianas. Una tinción diferencial típicamente consiste detres pasos principales: primero un colorante primario, el cual se utiliza para teñir a todas las células en la tinción; enseguida un paso de decoloración, el cual remueve el colorante solo de ciertos tipos de células y finalmente un colorante de contraste, el cual tiñe las células recién decoloradas pero no tiene efecto sobre las células que aún retienen el colorante primario. (1)

La tinciónpropuesta por el médico danés Christian Gram en 1884, es una de las tinciones diferenciales más utilizadas en bacteriología, que clasifica los cultivos bacterianos de menos de 24 horas en Gram positivas y Gram negativas. La reacción de la tinción de Gram se basa en la cantidad de peptidoglucano que se encuentra en las paredes celulares de estas bacterias. Las bacterias Gram positivas tienen muchascapas de peptidoglucano, las cuales a su vez, sostienen
moléculas de ácido teicoico. El ácido teicoico reacciona con el cristal violeta y el yodo utilizado en este proceso de tinción. Un complejo de las moléculas cristal violeta-yodo-ácido teicoico es muy difícil de remover. Como la pared celular de las células Gram positivas retiene estos compuestos, es más difícil decolorar una célula Grampositiva que una Gram negativa. Una mezcla de alcohol remueve el cristal violeta de la célula Gram negativa, pero no de la Gram positiva. Esta mezcla de alcohol también disuelve mucho de la capa exterior de lipopolisacárido de la pared celular de la pared Gram negativa, lo cual acelera la remoción del colorante primario cristal violeta de estas células.

Cuando otro colorante, usualmente safranina,se añade, las células Gram positivas siguen de color azul-violeta mientras que las Gram negativas absorben el color rojizo de la safranina. Al final del procedimiento de tinción, las células Gram positivas serán del color del cristal violeta, o colorante primario, y las células Gram negativas serán del color de la safranina que es el colorante de contraste. (2)

MECANISMO DE LA TINCION DE GRAMSUSTANCIAS | Reacción y coloración de bacterias |
| GRAM + | GRAM - |
1) Cristal violeta | Células color violeta | Células color violeta |
2) Lugol solución iodada | Se forma el complejo CV-I. Las células continúan teñidas de color violeta. | Se forma el complejo CV-I. Las células continúan teñidas de color violeta. |
3) Alcohol | Se deshidratan las paredes celulares. Se  contraen losporos. Disminuye la permeabilidad. El complejo CV-I no sale de las células que continúan teñidas de color violeta. | Eliminación por extracción de grasas de las paredes celulares. Aumenta la porosidad. El complejo CV-I se separa de la célula. |
4) Safranina | Células no decoloradas; quedan teñidas de color violeta. | Células decoloradas; se tiñen de color rosado. |

A partir de la tinción deGram pueden distinguirse varias formas distintas:
* Los cocos de forma esférica. Pueden presentarse aislados después de la división celular (Micrococos), por pares (Diplococos), formar cadenas (Estreptococos), o agruparse de manera irregular (Estafilococos).
* Los bacilos poseen forma alargada. En general suelen agruparse en forma de cadena (Estreptobacilos) o en empalizada.
* También...