TINCIONES FUNDAMENTOS PDF

Laboratorio 4:
Tinción de microorganismos
Biol 3725L

Repaso de diluciones
1 ml

0.1 ml

1 ml

1 ml

1 ml

9 ml
1 / 10
10-1

99 ml
1 / 100
10-3

9 .9ml
0.1/ 10
1/ 100
10-5

9 ml
1/10
10-6

9 ml
1/10
10-7

1 ml

1 ml

0.1 ml

1 ml

¿Cuántas colonias viables
tengo?
1. Escojo el plato que tenga
entre 25 – 250 UFC.
2. Utilizo la fórmula de:
UFC * (1/factor de
dilución)

10-8

TMTC

10-6

265 UFC10-7

25 UFC

2 UFC

Reportar datos:
1. Placas con estriado: obtuvo o no colonias discretas
2. Dilución en serie: reporte UFC/mL para las tres placas
utilizadas en su sub-grupo (incluya los cálculos)

Objetivos
• Conocer el mecanismo básico y ventajas de una
tinción.
• Aprender conceptos básicos relacionados a:
•
•
•
•
•

Proceso de preparación de un frotis
Tinción Gram
Tinción Ácido-ResistenteTinción de Esporas
Tinción de Cápsula (negativa).

• Identificar características en las bacterias en estudio
en base a las diferentes tinciones.

Tinciones de microorganismos
• Tinción Gram (práctica)
• Tinción de Cápsulas - Tinción Negativa (práctica)
• Tinción de Esporas (práctica)
• Tinción Ácido-Resistente (teoría)
• Tinción de flagelos (teoría)

Morfología y agrupación de
bacterias
Ya se handiscutido métodos
de clasificación por morfología
y medios de cultivo.
Ahora utilizaremos tinciones
con el fin de poder seguir
caracterizando a las bacterias.

Espiroquetas
Coco
Bacilo

Morfología y agrupación de bacterias:
Tinción
• La tinción es una de las técnicas más utilizadas en los
laboratorios de microbiología para clasificar microorganismos.
• El tinte es un compuesto orgánico que le dacontraste a la
célula.
• cromógeno (solvente orgánico que le provee las
propiedades de color)
• auxócromo (grupo químico que se ioniza con el cromógeno
y forma sales que se pegan a las fibras y tejidos).
• La adhesión del tinte va a depender de la carga que posea.

Tinción

Tipos de Tinciones
• Simple
• Tamaño, arreglo
y forma
• Un solo tinte
• Directa
• Tiñe bacteria
• Negativa
• tiñe el fondopero no a la
bacteria

•Diferencial
•Separar y clasificar
los microorganismos
observados de
acuerdo a sus
características
•Más de un tinte

•Ejemplos:
Tinción Gram y Ácido
resistente

• Específica
•Para identificar
estructuras:
•Ejemplos: Tinción
de flagelos,
cápsulas y esporas.

Tinción simple: un solo tinte , afinidad por carga con componentes
de la superficie de la célula
Ejemplo : azul demetileno
(+)

(-)

(-) (-)
(-)

(-)

(-)

(-)
methylene blue

(-)

(-)
(-)

(-)

(-)
(-) (-)

Tinción diferencial: permite detectar tipos distintos de células
Azul-Violeta

Rojo

Pasos de la
Tinción Gram
Cristal violeta (1
minuto)
Lavar con agua (Streptococcus sp.)
Yodo (1 minuto)
Lavar con agua
Alcohol etílico al
95% (20 segundos)
Lavar con agua
Safranina (1 minuto)
Lavar con agua
Secar conbibolous
paper

Gram+= azul-violeta,
Gram – = rojo

(Escherichia coli)
Desventajas de técnicas de
tinción:

• requieren fijar la muestra
con calor: (células mueren)
• calor + químicos pueden
distorsionar la forma original
de las células

Tinción Gram
• Tinte primario- Cristal Violeta (CV), tiñe la bacteria
color violeta.
• Agente mordante- Yodo, forma un complejo insoluble
con CV. Ayuda a adherir eltinte a la célula. Ayuda a
resistir la decoloración.
• Agente decolorizante- alcohol etílico al 95%, sirve
como solvente de lípidos y agente deshidratante de
proteínas. Remueve el cristal violeta.
• Contratinte- Safranina, tiñe de rojo la bacteria.

Resultados - Tinción Gram

Gram Negativo

Gram Positivo

Su pared celular contiene una
capa gruesa de
peptidoglicano

Gram +

Reacción se basa en ladiferencia en la composición
química de la pared bacteriana.

Gram Su pared celular contiene una
capa fina de peptidoglicano

Pared celular procariota
Peptidoglicano: polímero de dos azúcares modificadas (N-acetil glucosamina
y N-acetil ácido murámico ) y tetrapéptidos
enlace β, 1-4

G

M

G

G

G

M

G

M

4

3

M

M

M

G

G = N-acetil glucosamina
M = N-acetil ácido murámico (mureína)

M

G

M...