Tinciones Simples y compuestas

TINCIONES SIMPLES
PRACTICA N°7
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA GENERAL
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS
UNIVERSIDAD DE PAMPLONA



OBJETIVOS.
Identificar por emdio de tinciones simples los diferentes microorganismos de la practica
realizan las tinciones simples sobre preparaciones previamente secadas. Llevando a cabo los requerimientos de la guía de laboratorioDescribir lo observado en el microscopio según el microorganismo y la tinción utilizada.


INTRODUCCION
La tinción simple es utilizada para destacar microrganismos a fin de determinar las formas y las disposiciones celulares. Las células se tiñen con una solución acuosa o alcohólica de un colorante básico solo.
Tinciones simples:

a) Azul de metileno
b) Violeta cristal
c) Verde demalaquita
d) Safranina




MARCO TEORICO
La tinción simple se basa en la afinidad del colorante por los componentes celulares. La tinción puede ser uniforme o presentar algunos gránulos en su interior. Utiliza un solo colorante (violeta de genciana, azul de metileno, fuscina diluida).La tinción simple se utiliza para destacar el microorganismo completo para que se vean las formas y lasestructuras celulares básicas. En las tinciones simples se usa un único reactivo, que preferentemente es de tipo básico y contiene un cromógeno (compuesto que da color al tinte) con carga positiva, ya que la pared celular de las bacterias posee componentes con carga negativa que atraen y enlazan el cromógeno. Se utilizan solamente para incrementar el contraste; todas las células absorberán el colorante yquedarán teñidas delmismo color. Por tanto, la tinción simple mejora la observación de la célula completa. Se fija el espécimen, seañade el colorante y se deja el tiempo adecuado para que se absorba, se retira el exceso de colorante y la preparación ya está lista para ser observada. Si se utiliza un mordiente (sustancia química utilizada par intensificar la coloración), hay que añadirlo justoantes del colorante.



PROCEDIMIENTO
1. Limpiar las láminas (con agua jabón, papel, luego desengrasar con alcohol, dejando evaporar, esta es esencial ya que la grasa o aceite de los dedos no permiten una buena elaboración de frotis).

2. Identificar la lámina con nombre o numeración de la muestra.

3. Si la muestra es de cultivo en caldo:
Tomar una o dos asadas de células suspendidas yaplíquelas directamente sobre la lámina con un asa de inoculación estéril y extienda el volumen allí aplicando de manera circular, luego extienda longitudinalmente en la placa.

4. Si la muestra es de cultivo sólido :
Colocar una gota de Solución salina Estéril al ( 0.85 % ) sobre la lámina o portaobjetos.

Transferir una pequeña cantidad de células desde el cultivo a la lámina con el asa deinoculación estéril, emulsionando con la solución salina estéril obteniendo así una suspensión semitransparente de forma circular. Colocar el inóculo a un lado y en caso de requerir mas, tomar más inoculo y luego homogenice.
Permitir que el extendido se seque al aire. NO SOPLAR U ONDULAR LA PREPARACIÓN EN EL AIRE.
Fijar al calor la preparación para evitar la elusión del frotis durante la tinción.Realizar esta fijación pasando el extendido seco dos o tres veces sobre la llama de un mechero de Bunsen.

PROCEDIMIENTO PARA TINCIONES SIMPLES
1. Realizar el frotis con la técnica adecuada para los microorganismos asignados por el tutor y fíjelo al calor.



2. Coloque la lámina en la bandeja de coloración y vierta sobre el frotis uno de los siguientes colorantes indicados usando eltiempo de exposición adecuados para cada uno:



COLORANTE
TIEMPO DE EXPOSICION
Carbolfuchsina
15 a 30 segundos
Cristal violeta
20 a 60 segundos
Azul de metileno
1 a 2 minutos


3. Lave el frotis con agua de la llave a baja presión y remueva el exceso de colorante.


4. Permita que se seque al aire dejando la lámina en posición inclinada.


5. Observe al microscopio 4 – 10 – 40...