TP n°6 : Cromatografia de particion

TP N°6: Cromatografía de Partición

Objetivo: Manejar la técnica de cromatografía de partición en placas de celulosa. Se aplicara dicha técnica al caso separativo de hidratos de carbono. Secomparará la corrida de la muestra incógnita con la de azucares testigo para dilucidar su composición.
Cromatografía de partición (líquido-líquido)
La cromatografía de partición se basa en la diferenciade solubilidad de un compuesto entre la fase móvil y la fase estacionaria. Lo que caracteriza a esta técnica, es que la fase estacionaria es agua, retenida sobre diferentes tipos de soporte. La fasemóvil es un líquido inmiscible con agua (pero saturado de agua). La separación se basa en la distribución selectiva de los solutos en las fases, según sus constantes de partición particulares.
Comolos solutos a cromatografiar son de estructura similar se requiere una larga distancia recorrida por el solvente para visualizar una separación aceptable entre los compuestos. En estos casos no seestablece un tope al frente del solvente, sino que se lo deja gotear.
Las movilidades relativas se miden en relación a la movilidad de una sustancia que se siembra en la misma corrida, en este casoglucosa, como patrón interno (Rg: distancia X / distancia Glc).

Desarrollo de la práctica
Obtención de la muestra incógnita:
1) Extracción de los hidratos de carbono: Suspender 10 g del materialvegetal en 100 mL de agua destilada y realizar una extracción a ebullición por 20 min. Luego separar el residuo sólido por decantación, filtración utilizando papel de fibra de vidrio, embudo con vidriofritado o centrifugación según el material utilizado. Tratar el sobrenadante con volúmenes de etanol para precipitar los polisacáridos, dejar una noche en heladera, centrifugarlos y liofilizarlos, o biensecarlos en estufa a 40°C.
2) Análisis de la composición de monosacáridos: Se efectuara la hidrólisis del extracto liofilizado. Pesar 3 mg del extracto liofilizado y colocarlos en viales...