Trabajo final biologia molecular.

TRABAJO FINAL BIOLOGIA MOLECULAR.

PRESENTADO POR: Angela Buitrago Mejia codigo: 070150472010 Roger Rodriguez Ardila codigo: 070100152009 Cindy Estefanny Molina. Codigo: 070100092009

UNIVERSIDAD DEL TOLIMA. FACULTAD DE CIENCIAS DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA IBAGUE-TOLIMA 2012

TRABAJO FINAL BIOLOGIA MOLECULAR.

PRESENTADO POR: Angela Buitrago Mejia codigo: 070150472010 Roger Rodriguez Ardilacodigo: 070100152009 Cindy Estefanny Molina. Codigo: 070100092009

PRESENTADO A: Daniel Urrea.

UNIVERSIDAD DEL TOLIMA. FACULTAD DE CIENCIAS DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA IBAGUE-TOLIMA 2012

INTRODUCCIÒN Los seres vivos nacemos con cierta información que se hereda, la cual se encuentra almacenada en una molécula de “ADN”, tras el descubrimiento de esta, a sido de gran interés conocer todos losaspectos que la rodean y la componen, esto se logra a través de métodos moleculares, los cuales han generado un gran avance en las ciencias biológicas, debido a los incontables campos en los que se desarrolla y los beneficios que se obtienen a partir de estos, de ahí la importancia de una práctica adecuada de los mismos. Las técnicas principales empleadas para el estudio del ADN son: PCR que esutilizado para la amplificación de un fragmento de DNA específico y la electroforesis que es la técnica utilizada para la separación de moléculas mediante el movimiento de estas en un campo eléctrico.

OBJETIVO GENERAL Conocer, comprender y aplicar el método de aislamiento de ácidos nucleicos de muestras biológicas así como su análisis por medio de electroforesis. OBJETIVOS ESPECIFICOS Entendercomo y para que se realiza la digestión de muestras biológicas y su importancia como primer paso del aislamiento de ácidos nucleicos. Extraer y precipitar ácidos nucleicos en laboratorio y comprender cada uno de los procesos. Amplificar DNA en laboratorio mediante reacción en cadena de la polimerasa teniendo en cuenta el por que de sus tres pasos fundamentales. Realizar electroforesis en geles deagarosa y poliacrilamida y conocer los principios de este proceso. Debatir acerca del tipo de cepa de Tryponasoma rangeli estudiada en el laboratorio.

PRACTICA DE LABORATORIO 1: MANEJO Y RECONOCIMIENTO DE EQUIPOS Y MATERIAL BASICO DE LABORATORIO. 1.1. MANEJO Y RECONOCIMIENTO DE MICROPIPETAS

Se tomo una solución stock del colorante giemsa, se adicionó agua y de esta dilución se extrajeron 20µl a un tubo eppendorf 1.2. PREPARACION DILUCIONES SERIADAS Y DISCONTINUAS

Diluciones continuas: [giemsa] → Volumen: 1µl +9 µl H2O→ 10µl 1/10 1/2 solución anterior+ 5 µl H2O→ 10µl 1/20 1/2 solución anterior+ 5 µl H2O 10µl 1/40 → (…)

Diluciones discontinuas: V1 C1 = V2 C2 Donde: V= Volumen, C= concentración

PRACTICA DE LABORATORIO 2: PREPARACION DE MUESTRAS BIOLOGICAS PARA LA EXTRACCION DEACIDOS NUCLEICOS. Se usaron formas de cultivo in vitro de Trypanosoma rangeli Se tomó 1 ml de cultivo y se centrifugó a 7000 rpm durante 5 minutos para separar en dos fases la mezcla ya que este método de separación físico permite separar sólidos de líquidos o líquidos de diferente densidad mediante una fuerza rotativa que provoca una fuerza varias veces mayor a la de gravedad induciendo lasedimentación de las partículas de mayor densidad. Lo que garantizara que en el pellet se acumulen todos los microorganismos y en el sobrenadante queden las impurezas. Se eliminó sobrenadante. Se adicionó 1 ml de solución salina fisiológica, esto con el fin de diluir las células bacterianas. Se agito y centrifugo durante 5 minutos a 700 rpm. Se repitió el paso anterior hasta que fue necesario (3 veces)Se adicionó el mismo volumen de buffer de lisis. En primera instancia el NaCl produce un ambiente hipertónico por lo que ocurre la lisis celular por plasmólisis, esta plasmólisis producirá la liberación de nucleasas, cuya función es destruir el DNA, para esto se bloquea la acción de estas enzimas por el segundo componente de la solución de lisis: el EDTA que forma complejos con los iones...