transfomacion

Abstract

Transformación bacteriana es el proceso de introducir ADN foráneo a una célula bacteriana. La nueva molécula de ADN se introduce en forma de plásmido, una molécula de ADN circular. Para nuestro estudio se introdujo un vector que tenia el lacZ operon y un gen de resistencia a ampicilina. Nuestra hipótesis fue que si las colonias contenían el plásmido, crecerían solo colonias decolor azul por metabolizar lactosa. El plásmido se introdujo por el proceso de transformación que consistió en resuspender las células en un medio de transformación, se sometieron a bajas temperaturas, se agrego el plásmido y se sometieron a tres cambios de temperatura repentinos de frio a caliente. Después de exponer a las células a esta situación de estrés, se dejaron 1 hr. a 37 C con un medio ricoen nutrientes. Se cultivaron en un medio solido con antibiótico ampicilina. Logramos observar colonias color crema y azules. Las colonias de color azul indica que se introdujo el vector en la célula y la colonias color crema que el plásmido esta en la célula pero el lacZ operon no fue traducido. Por lo tanto nuestra hipótesis no fue apoyada completamente porque el color de las colonias no es unindicador de que el plásmido esta en la célula.


Introducción

La biotecnología es un rama de la biología que se dedica a usar organismos para producir productos para beneficio del ser humano (Brooker 2008). Los comienzos de la biotecnología vienen desde tiempo antiguos, desde la fabricación de cerveza y vino por antiguas civilizaciones. Sin embargo, fue en 1970 que este tecnología llegotambién en los laboratorios de biología. Con el creciente conocimiento de cómo es que funcionaba el material genético se pudieron diseñar diferentes técnicas que permitían modificar el material genético de un organismo. Se comenzó por organismos mas sencillos, las bacterias (Brooker 2008).
Un ejemplo es el caso de la insulina. Los pacientes que sufren de diabetes tienen que obtener insulina de otrafuente ya que su cuerpo no produce la necesaria para su cuerpo y por lo tanto se necesitaba obtener la insulina de otro lado (Bauman 2007). Al principio esto se logro al extraerla de animales como los cerdos. No obstante, la demanda del producto se hizo demasiado grande y este proceso no era lo suficientemente efectivo para suplir a todos los pacientes. Así que se ingenio una manera novedosa parasintetizar la insulina. Se clono el gen que codifica para la insulina humana y se inserto a un vector de replicación lado (Bauman 2007). Por la técnica de transformación se introdujo a una célula bacteriana y por varios procesos bioquímicos se indujo la producción de insulina. Posteriormente se purifico para que fuera apta para uso humano. Esto permitió que la demanda por el producto fuerasuplida y sin tener que depender de los modelos mamíferos lado (Bauman 2007).
Pero ¿cómo funciona la el proceso de introducir ADN foráneo en un célula bacteriana? Primero se identifica el gen de interés, para seguir con el ejemplo dado hablaremos de la insulina. Una vez se tenga identificado se utilizan enzimas de restricción, enzimas especializadas en digerir ADN, para obtener solo la secuenciagenética de la insulina. Por otro lado tenemos un vector diseñado sintéticamente que contiene el gen de resistencia a un antibiótico (Chen y Dubnau 2004). Este vector es digerido también por las enzimas de restricción y al igual que nuestro gen termina con complementario sencillos que encuentra pariedad con el gen y el vector. Para garantizar el enlace de nuestro gen y el vector se añaden ligasas,enzimas especializadas en unir covalentemente el esqueleto de fosfato del ADN (Chen y Dubnau 2004).
Una vez tenemos nuestro vector con nuestro gen de interés sometemos a la célula bacteriana al proceso de transformación. Este proceso consiste de hacer que la membrana de la célula se haga temporeramente permeable para poder introducir nuestro vector recombinado. Para lograr que la membrana sea...