Transformación De Bacterias
Páginas: 6 (1314 palabras)
Publicado: 18 de mayo de 2012
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍA
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA MOLECULAR
“TRANSFORMACIÓN DE BACTERIAS”
ALUMNAS:
DRPV
PME
SAGE
INTRODUCCIÓN
Transformación de bacterias
La transformación es el proceso en el que las células procariontes toman DNA exógeno del ambiente, alterando a su fenotipo y el de sus descendientes. Laentrada del DNA a las células es independiente de la fuente de este y es muy dependiente del estado físico-químico del DNA.
La captación de moléculas de DNA por la bacteria receptora es un proceso activo, que requiere energía. No implica la entrada pasiva de moléculas de DNA através de paredes celulares y membranas permeables aunque es posible inducir este tipo de captación de moléculas de DNApor medio de la manipulación experimental de bacterias en el laboratorio. La transformación no ocurre “naturalmente” en todas las especies de bacterias sino solo en aquellas especies que tienen la maquinaria enzimática que interviene en la captación activa del DNA y los procesos de recombinación. Solo las células competentes, aquellas que poseen el denominado factor de competencia (probablementeuna proteína de la superficie celular o una enzima que interviene en la unión o la captación de DNA), son capaces de funcionar como receptores de la transformación.
El proceso de transformación puede dividirse en varias etapas: 1) unión de moléculas bacterianas o de doble cadena de DNA a los sitios receptores de la superficie celular; 2) captación irreversible del DNA del donador (etapa en laque el DNA donador se hace resistente a la DNAasa del medio; 3) conversion de las mleculas bacterianas de DNA del donador en moléculas de cadena sencilla o monocaterianas por digestión nucleolitica de una cadena: 4) integración (inserción covalente) de toda o parte de la cadena sencilla de DNA del donador en el cromosoma del receptor y 5) segregación y expresión fenotipica del gen o genes donadoresintegradosde la celula recombinante(“transformada”) .
Se transformaran células de E. coli para demostrar la habilidad de este DNA para modificar permanentemente la herencia genética de las células que lo adquieren.
Las células blanco que adquieran el plásmido se transformarán, de un fenotipo sensible al antibiótico, a otro, resistente al antibiótico. Después de mezclase con el plásmido,encontraremos a las células resistentes al antibiótico sembrando las células tratadas sobre cajas de agar que contienen antibióticos. El antibiótico matará cualquier célula que no adquiera al plásmido.
Polymerase Chain Reaction (PCR)
La PCR es de una gran simplicidad. Se preparan dos oligonucleótidos sintéticos, cada uno complementario de secuencias de las hebras opuestas del DNA diana,situadas justo mas alla de los extremos del segmento que de debe amplificar. Los oligonicleotidos sirven de cebadores para la replicación, con los extremos 3’ de las sondas hibridadas orientadas uno hacia el otro y posicionados para cebar la síntesis a lo largo del segmento de DNA deseado.
Aplificacion de DNA mediante la reacción en cadena de la polimerasa
a) El procedimiento de la PCR tienetres pasos 1) Se separan las cadenas de DNA por calentamiento, a continuación 2) se hibridan con un exceso de cebadores de DNA sintéticos cortos (azul), que flanquean la región que se desea amplificar; 3) el DNA nuevo se sintetiza por polimerización. Los tres pasos se repiten unos 25 o 30 ciclos. La DNA polimerasa termoestable TaqI (de thermus aquaticus, una especie bacteriana que vive enmanantiales de agua caliente) no se desnaturaliza en las etapas de calentamiento. b) El DNA mplificado por la PCR puede ser clonado. Los cebadores pueden incorporar DNA no complementario en los extremos que contengan el sitio de corte de una endonucleasa de restricción. Aunque estas partes de los cebadores no se aparean con el DNA diana, el proceso de la PCR los incorpora al DNA que es amplificado. El...
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍA
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA MOLECULAR
“TRANSFORMACIÓN DE BACTERIAS”
ALUMNAS:
DRPV
PME
SAGE
INTRODUCCIÓN
Transformación de bacterias
La transformación es el proceso en el que las células procariontes toman DNA exógeno del ambiente, alterando a su fenotipo y el de sus descendientes. Laentrada del DNA a las células es independiente de la fuente de este y es muy dependiente del estado físico-químico del DNA.
La captación de moléculas de DNA por la bacteria receptora es un proceso activo, que requiere energía. No implica la entrada pasiva de moléculas de DNA através de paredes celulares y membranas permeables aunque es posible inducir este tipo de captación de moléculas de DNApor medio de la manipulación experimental de bacterias en el laboratorio. La transformación no ocurre “naturalmente” en todas las especies de bacterias sino solo en aquellas especies que tienen la maquinaria enzimática que interviene en la captación activa del DNA y los procesos de recombinación. Solo las células competentes, aquellas que poseen el denominado factor de competencia (probablementeuna proteína de la superficie celular o una enzima que interviene en la unión o la captación de DNA), son capaces de funcionar como receptores de la transformación.
El proceso de transformación puede dividirse en varias etapas: 1) unión de moléculas bacterianas o de doble cadena de DNA a los sitios receptores de la superficie celular; 2) captación irreversible del DNA del donador (etapa en laque el DNA donador se hace resistente a la DNAasa del medio; 3) conversion de las mleculas bacterianas de DNA del donador en moléculas de cadena sencilla o monocaterianas por digestión nucleolitica de una cadena: 4) integración (inserción covalente) de toda o parte de la cadena sencilla de DNA del donador en el cromosoma del receptor y 5) segregación y expresión fenotipica del gen o genes donadoresintegradosde la celula recombinante(“transformada”) .
Se transformaran células de E. coli para demostrar la habilidad de este DNA para modificar permanentemente la herencia genética de las células que lo adquieren.
Las células blanco que adquieran el plásmido se transformarán, de un fenotipo sensible al antibiótico, a otro, resistente al antibiótico. Después de mezclase con el plásmido,encontraremos a las células resistentes al antibiótico sembrando las células tratadas sobre cajas de agar que contienen antibióticos. El antibiótico matará cualquier célula que no adquiera al plásmido.
Polymerase Chain Reaction (PCR)
La PCR es de una gran simplicidad. Se preparan dos oligonucleótidos sintéticos, cada uno complementario de secuencias de las hebras opuestas del DNA diana,situadas justo mas alla de los extremos del segmento que de debe amplificar. Los oligonicleotidos sirven de cebadores para la replicación, con los extremos 3’ de las sondas hibridadas orientadas uno hacia el otro y posicionados para cebar la síntesis a lo largo del segmento de DNA deseado.
Aplificacion de DNA mediante la reacción en cadena de la polimerasa
a) El procedimiento de la PCR tienetres pasos 1) Se separan las cadenas de DNA por calentamiento, a continuación 2) se hibridan con un exceso de cebadores de DNA sintéticos cortos (azul), que flanquean la región que se desea amplificar; 3) el DNA nuevo se sintetiza por polimerización. Los tres pasos se repiten unos 25 o 30 ciclos. La DNA polimerasa termoestable TaqI (de thermus aquaticus, una especie bacteriana que vive enmanantiales de agua caliente) no se desnaturaliza en las etapas de calentamiento. b) El DNA mplificado por la PCR puede ser clonado. Los cebadores pueden incorporar DNA no complementario en los extremos que contengan el sitio de corte de una endonucleasa de restricción. Aunque estas partes de los cebadores no se aparean con el DNA diana, el proceso de la PCR los incorpora al DNA que es amplificado. El...
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