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CUANTIFICACION DE LOS FENOLES TOTALES EN LA MATERIA PRIMA EN LA BEBIDA DE MAIZ
Para la determinación de los fenosles totales se utilizara el método swain y hilis 1959 ,el cual emplea elreactivo folin- ciocalteu y cuyo procedimiento se detalla continuamente .
1 colocar 5g. de muestra y 20ml de metanol o etanol al 95% dentro de un matraz
2 mezclar con un homogenizador aalta velocidad hatas una consistencia uniforme (1/2)en un minuto
3 dejar el homogenizado en reposo por 12-24 horas en refrigeración 4 grados c
4 entes tomar una alícuota para analizar ,cenrtrifugar el homogenizado por 15 min.a 14,500RPM .
5 con una micropipeta tomar 0.5 ml de la muestra, sobrenadante claro. Y 8ml de agua manopura y mezclar. Al mismo tiempo,prepararun blanco con0.5 ml de metnol (etanol 95% ) y correr el ensayo de la misma manera para todos las muestras.
6 Añadir 0.5ml del reactivo folin-ciocalteu 0.25n,mezclar y dejar reaccionar por 3m.
7 A los 3minutos añadir1 mL de NaCO3 1 N con una micropipeta ,mezclar y dejar reaccionar por 10 minutos.
8 Centrifugar por 15 minutos a 14,500RPM.
9 Llevar el espectrofotómetro a cero con unasolución blanco de metanol (etanol 95%).
10 Colocar la alícuota del sobrenadante en una cubeta de vidrio.golpear la cubeta para desprender la burbujas y llevar al espectrofometro a una lectura de 725nm.
11 Si la lectura de la absorbacia es por encima de 0.6, diluir la muestra con metanol(o etanol 95%)y proceder con la reacción de nuevo (paso 5).por ejemplo para una mezcla de 0.2 mL se añade0.3 mL .
12 Guardar las lecturas de la absorbancia cada 30 minutos hasta que no haya cambios significativos en la absorbancia absorveda.
13 Estimar la cantidad de fenoles totales a partirde una curva estándar desarrolada para acido clorogenico.

Los fenoles totales son expresados basados en equivalente de acido clorogenico (Acid.clor.eqv)

Acid.clor.eqv.=(a+bx)(mLdel extracto...
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