Transporte protónico através da membrana tilacóide

Ano Lectivo 2011/2012

UNIVERSIDADE DE ÉVORA

Transporte Protónico Através da membrana Tilacóide
ROUXINOL, Maria Inês (l27322@alunos.uevora.pt) RUZA, Diana (l28052@alunos.uevora.pt) Resumo O objectivo do trabalho prático realizado foi determinar o transporte protónico através da membrana tilacóide nos espinafres. Para isso foi tratada uma solução de espinafres (da qual foi determinada tambéma concentração de clorofila), que permitiu o estudo do transporte protónico através das variações de pH da solução quer quando se encontrava sob a incidência de luz, quer não. Com isto determinou-se a influência da luz neste processo, e as suas variações de pH. Abstract The aim of the practical work was to determine the proton transport through the thylakoid membrane in spinach. For this aspinach solution was created (in which was also determined the concentration of chlorophyll), which allowed the study of proton transport through changes in pH of the solution or when it was under a bright light or not. This determined the influence of light on this process, and its changes in pH. Palavras-Chave Cloroplastos, clorofila, fotossíntese, membrana tilacóide, transporte protónico Introdução Afotossíntese é um processo em que a energia da luz do sol se transforma em energia química na forma de NADH e ATP, esta pode dividir-se em reacções luminosas e reacções escuras. As reacções luminosas consistem numa sequência de etapas de transporte electrónico em que os electrões são transferidos da água ao NADP+, formando-se NADPH. A equação geral da fotossíntese pode traduzir-se por: 12H2O +6CO2 → 6O2 + 6H2O + C6H12O6 A fotossíntese dá-se num organelo celular denominado cloroplasto. Os cloroplastos estão envoltos numa membrana dupla, a membrana externa, totalmente permeável a substâncias de baixo peso molecular, enquanto que a membrana interna é permeável só a algumas substâncias, incluindo o CO2. A região envolta pela membrana interna no cloroplasto chama-se estroma. Dentro do estromaexiste uma membrana continua denominada membrana tilacoidal. A membrana tilacoidal contém os fotossistemas I e II, os outros componentes de transporte electrónico e ATP sintetase. As reacções escuras da fotossíntese convertem o CO2 em hidratos de carbono mediante de um caminho denominado ciclo de redução fotossintética do carbono. Este ciclo ocorre no estroma do cloroplasto, consome ATP e NADPHsintetizados nas reacções luminosas da fotossíntese.
Curso: Bioquímica | Disciplina: Bioquímica 1

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O ADP, o Pi e NADP+ produzidos são depois utilizados como substratos nas reacções luminosas. Procedimento Para dar inicio à pratica experimental, foi necessário proceder ao isolamento de cloroplastos de folhas de espinafre. Para tal as folhas foramhomogeneizadas com 100 mL de tampão Tricina-NaOH 0,02M pH 8,0, NaCl 0,01M e Sacarose 0,4M. Depois disto o homogeneizado foi filtrado e transferido para tubos de centrifuga e centrifugou-se a 4000g durante 4 minutos. Desprezou-se o sobrenadante e ressuspendeu-se o sedimento em 25mL de tampão Tricina 0,02M pH 8,0, NaCl 0,01M, Sacarose 2,1mM. Agitou-se ate se obter uma suspensão homogénea econservou-se no escuro e no frio. Depois disto foi determinado o conteúdo em clorofila, para tal, adicionou-se 0,05mL de suspensão 9,95 mL de acetona 80%. Transferiu-se o conteúdo para uma célula e mediu-se a absorvância a 652 nm contra branco de acetona 80%. Determinou-se a concentração de clorofila através da fórmula: µg clorofila/mL=(Abs*1000)/34 Tendo-se obtido o valor de 61,47µg clorofila/mL. Apósesta determinação seguiu-se o estudo do transporte protónico através da membrana tilacóide. Para o efeito colocou-se o balão com a suspensão numa placa com agitação com um pequeno magnete. Envolveu-se o balão com papel de alumínio e manteve-se sob agitação lenta. Procedeu-se ao acerto do pH da solução a 6 com ácido clorídrico diluído e mediu-se o pH de dois em dois minutos até ser atingindo um...