Trasporte Celular
Páginas: 3 (710 palabras)
Publicado: 23 de mayo de 2012
Materiales y métodos
Materiales
• Papel parafilm
• 2 fiolas de 50 ml
• 30 tubos de ensayo de 15 ml
• 1 placa de 96 pocillos
• Pipetas Pasteur
• Pipetas de 0,1, 1 y 10 ml
Solucionesnecesarias
Cloruro de Sodio 150 mM (isotónico)
Cloruro de Sodio 258 mM (hipertónico)
Suspensión de eritrocitos lavda con NaCl 150 mM
Una solución problema que será entregada aleatoriamente yseleccionada de la siguiente lista:
Cloruro de Amonio 150 mM
Acetato de Amonio 150 mM
Sulfato de Amonio 100 mM
Acetato de Sodio 150 mM
Sulfato de Sodio 100 mM
Glucosa 300 mM
Etilenglicol 300 mM
Úrea 300 mM
Manitol 300 mM
Galactosa 300 mM
Métodos
Calibración del espectrofotómetro.
Se prepararon dos suspensiones de eritrocitos, una de 100% de hemólisis y otra de 0% dehemólisis
Suspensión de 100% hemólisis: se tomaron 0,5 ml de la suspensión de eritrocitos y se hemoliso con 10 ml de agua destilada, completando el volumen hasta 30 ml utilizando NaCl de 258 mM.Suspensión 0% de hemolisis: Se tomo 0,5 ml de la suspensión de eritrocitos y se añadió cuidadosamente solución salina (NaCl 150 mM) hasta completar un volumen final de 30 ml.
Posteriormente se coloco 6ml de cada una de estas soluciones en cubertas de Bausch & Lomb para fotocolorímetro, se ajusto el valor cero de densidad óptica (DO) con la suspensión de 100% hemolisis y luego se midio la DO de lasuspensión 0% hemolisis.
Construcción de una curva de calibración.
Se mezclaron las suspensiones de 0% y 100% hemolisis para preparar suspensiones de 25 50 y 75% hemolisis, siendo el volumenfinal de cada suspensión 6 ml. Se midieron las densidades ópticas correspondientes y se obtuvo una curva de calibración.
Construcción de una curva de fragilidad de los eritrocitos.
Se prepararonsoluciones de NaCl con concentraciones finales de 0, 30, 60, 90, 120 y 150 mM, siendo el volumen final de 14 ml y partiendo de una solución madre de NaCl 150 mM
Se coloco en 12 tubos de ensayo 5,9 ml de...
Materiales
• Papel parafilm
• 2 fiolas de 50 ml
• 30 tubos de ensayo de 15 ml
• 1 placa de 96 pocillos
• Pipetas Pasteur
• Pipetas de 0,1, 1 y 10 ml
Solucionesnecesarias
Cloruro de Sodio 150 mM (isotónico)
Cloruro de Sodio 258 mM (hipertónico)
Suspensión de eritrocitos lavda con NaCl 150 mM
Una solución problema que será entregada aleatoriamente yseleccionada de la siguiente lista:
Cloruro de Amonio 150 mM
Acetato de Amonio 150 mM
Sulfato de Amonio 100 mM
Acetato de Sodio 150 mM
Sulfato de Sodio 100 mM
Glucosa 300 mM
Etilenglicol 300 mM
Úrea 300 mM
Manitol 300 mM
Galactosa 300 mM
Métodos
Calibración del espectrofotómetro.
Se prepararon dos suspensiones de eritrocitos, una de 100% de hemólisis y otra de 0% dehemólisis
Suspensión de 100% hemólisis: se tomaron 0,5 ml de la suspensión de eritrocitos y se hemoliso con 10 ml de agua destilada, completando el volumen hasta 30 ml utilizando NaCl de 258 mM.Suspensión 0% de hemolisis: Se tomo 0,5 ml de la suspensión de eritrocitos y se añadió cuidadosamente solución salina (NaCl 150 mM) hasta completar un volumen final de 30 ml.
Posteriormente se coloco 6ml de cada una de estas soluciones en cubertas de Bausch & Lomb para fotocolorímetro, se ajusto el valor cero de densidad óptica (DO) con la suspensión de 100% hemolisis y luego se midio la DO de lasuspensión 0% hemolisis.
Construcción de una curva de calibración.
Se mezclaron las suspensiones de 0% y 100% hemolisis para preparar suspensiones de 25 50 y 75% hemolisis, siendo el volumenfinal de cada suspensión 6 ml. Se midieron las densidades ópticas correspondientes y se obtuvo una curva de calibración.
Construcción de una curva de fragilidad de los eritrocitos.
Se prepararonsoluciones de NaCl con concentraciones finales de 0, 30, 60, 90, 120 y 150 mM, siendo el volumen final de 14 ml y partiendo de una solución madre de NaCl 150 mM
Se coloco en 12 tubos de ensayo 5,9 ml de...
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