tuvieja



Introducción
Un plásmido es una unidad de ADN extracromosómico de tamaño variable (1‐ >100kb) que se replica de forma autónoma y autorregulada.
Se han hallado tanto en bacterias Gram positivas como Gram negativas, así como en  levaduras y algún otro tipo de hongo. A diferencia del DNA genético no codifican los genes esenciales para las funciones celulares, sin embargo, a menudo codificangenes que permiten a la bacteria portadora adaptarse mejor a condiciones externas adversas o competir en superioridad con otros microorganismos para  ocupar un nicho ecológico.
Esta ampliamente documentada la participación de los plásmidos en el soporte y movilización de genes de resistencia antibiótica y otros componentes tóxicos, en la mayoría de especies bacterianas de interésmédico. Este hecho, sumado a la capacidad de los mismos de transferirse entre diferentes especies bacterianas es de primordial importancia en la evolución de sus colonias.
Una misma célula bacteriana puede ser portadora de dos o más tipos de plásmidos diferentes,  
pudiendo estar cada uno de ellos en cantidades totalmente dispares.
La autoreplicacion de los plásmidos está determinada, junto a otras propiedades,por los genes localizados en una región especifica y esencial para plásmido que se encarga de su proceso de replicación y control. Dentro de esta región esencial se agrupan genes y secuencias fundamentales como son:  
- el origen de replicación (ORI). Un plásmido puede poseer más de un ORI y funcionar cada origen de manera simultánea e independiente.  
-los genes implicados en el necesario control de la replicación. Una función relacionada se
suma a ésta: el control del número de copias de un plásmido por célula.
- También, la mayoría de los plásmidos son portadores de un gen que codifica una proteína REP que funciona como primer de la replicación del DNA plasmídico. Estas proteínas REP son especificas de unión para ellas en el ORI. Estas proteínas codificadas por el propio plásmido nosolo cumplen funciones como iniciadores de la replicación, sino que son reguladoras de la frecuencia de dicha iniciación y también de su propia síntesis.
Objetivo
Extracción de DNA plasmídico (pBluescript II SK/KS) de Escherichia coli (bacteria Gram -).
Se utilizara como material de partida un cultivo de bacterias conteniendo el plásmido pBluescript.


ProcedimientoCuestionario
1- ¿Son esenciales los plásmidos para la supervivencia de la bacteria?
2- ¿Qué es la incompatibilidad plasmídica?
3- ¿Cuáles son los usos que se le dan a los plásmidos en biología molecular y celular?
4- ¿Qué utilidad tienen las distintas partes contenidas en el plásmido graficado en la figura?
5- ¿En que se basan los métodos de extracción plasmídicamás habituales?
6- ¿Qué métodos conoce para separar el DNA del RNA y las proteínas?
7- ¿Qué ventaja tiene, para este TP, utilizar una cepa conteniendo un plásmido de alto número de copias?
8- ¿Qué función cumple cada una de las soluciones utilizadas en el TP?
9- Si tiene 10 µl de una preparación de DNA plasmídico que se encuentra altamente contaminada con proteínas: a) ¿Qué puede hacer paraaumentar la pureza de su preparación? Y b) ¿y si además tiene un alto contenido de sales?

1- En general, los plásmidos, no contienen información esencial, sino que confieren ventajas al hospedador en condiciones de crecimiento determinadas. El ejemplo más común es el de los plásmidos que contienen genes de resistencia a un determinado antibiótico, de manera que el plásmido únicamente supondrá unaventaja en presencia de ese antibiótico. Por lo que no son esenciales para la supervivencia de la bacteria.
2- La incompatibilidad plasmídica se define como el fracaso de dos plásmidos co‐residentes 
para ser heredados de forma estable en ausencia de presión selectiva externa. Esta imposibilidad de dos plásmidos de convivir en una bacteria es consecuencia  de  compartir  elementos de...