Técnicas histológicas

TÉCNICAS HISTOLÓGICAS
La mayoría de las técnicas histológicas van encaminadas a preparar el tejido para su observación con el microscopio, bien sea óptico o electrónico. Existen procedimientos para la observación de tejidos y células vivas que reciben el nombre de vitales. Otra forma de observar células o tejidos vivos es mediante las técnicas histológicas supravitales, en los que las células ylos tejidos se "cultivan" fuera del organismo, como es el caso de los cultivos de células y de tejidos.
Las técnicas histológicas postvitales son aquellas en las que las células mueren durante el proceso, pero las características morfológicas y moleculares que poseían en estado vivo se conservan, más o menos dependiendo del tipo de técnica.
Denominamos proceso histológico a una serie de métodosy técnicas utilizados para poder estudiar las características morfológicas y moleculares de los tejidos. Hay diversos caminos para estudiar los tejidos, es decir, series de técnicas que se utilizarán dependiendo de qué característica deseemos observar.

El proceso histológico comienza con la obtención del tejido objeto de estudio. En el caso de los tejidos vegetales se toman muestras de losdistintos órganos que componen el cuerpo de la planta, mientras que para los tejidos animales podemos optar por dos opciones: coger una porción de dicho tejido o procesar una parte, órgano o parte corporal, o el animal completo. En cualquier caso las muestras son habitualmente fijadas con unos soluciones líquidas que contienen unas sustancias denominadas fijadores, las cuales mantienen lasestructuras celulares y moleculares en sus posiciones iníciales durante el procesamiento posterior. También podemos fijar las moléculas de los tejidos por congelación rápida. Fijar un tejido es como si hiciésemos una fotografía del tejido que se mantendrá hasta su observación. Sin embargo, el uso de fijadores o medios de inclusión afectan a veces las características tisulares que queremos observar y portanto tenemos que recurrir a la congelación para endurecer el tejido para después poder obtener secciones del mismo.
Normalmente, tras la fijación se procede a incluir el tejido para posteriormente obtener secciones. Cuanto más delgada queramos que sea nuestra sección más tenemos que endurecer nuestra muestra. Esto se consigue embebiendo el tejido con sustancias líquidas que posteriormentepolimerizarán (resinas) o se volverán consistentes (ceras). También se puede conseguir el mismo efecto mediante congelación rápida. Cortes más gruesos de 40 µm se pueden cortar sin necesidad de inclusión usando el vibratomo. Los medios de inclusión son normalmente no hidrosolubles por lo que tenemos que sustituir el agua de los tejidos por solventes orgánicos liposolubles y posteriormente añadir el mediode inclusión.
Tras la inclusión o la congelación se procede a cortar los tejidos. Existen diferentes aparatos de corte que permiten conseguir secciones ultrafinas (del orden de nanómetros), semifinas (de 0.5 a 2 µm), finas (entre unas 3 y 10 µm) y gruesos (mayores a 10 µm). Estas secciones hay que procesarlas para poder observarlas, aunque ciertos tipos de microscopía, por ejemplo con contraste defase, permiten observar tejidos sin teñir. Normalmente las secciones se tiñen con colorantes que son hidrosolubles, por lo que hay que eliminar el medio de inclusión para que los colorantes puedan unirse al tejido. Las secciones, secciones ultrafinas, que se observan con el microscopio electrónico se pueden contrastar con metales pesados, opacos a los electrones, sin eliminar la resina.

2.FIJACIÓN
Fijar un tejido es preservar sus características morfológicas y moleculares lo más parecidas posibles a las que poseía en estado vivo. Los fijadores deben proteger frente a ataques bacterianos, evitar autolisis, insolubilizar elementos solubles que se quieren estudiar, evitar distorsiones y retracciones tisulares, prenetrar y modificar el tejido para poder llevar a cabo tinciones...